Interferon Inhibition Enhances the Pilot-Scale Production of Rabies Virus in Human Diploid MRC-5 Cells.
Interferon Inhibition Enhances the Pilot-Scale Production of Rabies Virus in Human Diploid MRC-5 Cells.
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干扰素抑制增强人二倍体 MRC-5 细胞中狂犬病病毒的中试规模生产
DOI：
10.3390/v14010049
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发表时间：
2021-12-29
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Jiang C
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Yang X;Wan M;Cai L;Hou A;Sun B;Zhou Y;Gao F;Su W;Jiang C
基于细胞培养的灭活疫苗在预防和控制许多疾病方面非常有用。生产灭活疫苗最流行的策略是基于猴源性Vero细胞，这导致病毒的高生产力，但由于非人类DNA污染，具有一定的致癌风险。由于人类二倍体细胞（如MRC-5细胞）可以生产更安全的疫苗，因此已经研究了利用这些细胞开发灭活疫苗生产策略的工作，使用MRC-5细胞。然而，大多数病毒在MRC-5细胞中不能有效地复制。在这项研究中，我们发现狂犬病毒（RABV）感染在MRC-5细胞中激活了强大的干扰素(IFN)-β反应，但在Vero细胞中几乎没有，这表明IFN反应可能是病毒产生的关键限制因素。用IFN抑制剂处理MRC-5细胞可使RABV滴度提高10倍。此外，当使用IFN受体1 （IFNAR1）抗体时，RABV滴度提高了5倍。因此，我们建立了一个稳定的缺乏ifnar1的MRC-5细胞系（MRC-5IFNAR1−），与正常的MRC-5细胞相比，RABV的产量增加了6.5倍。此外，在1500平方厘米旋转瓶的中试生产中，MRC- 5ifnar1 -细胞系的使用或在MRC细胞中添加IFN抑制剂分别使RABV的产量增加了10倍或4倍。因此，我们成功建立了基于人二倍体细胞的狂犬病疫苗抑制IFN反应的中试规模病毒生产平台，该平台也可用于其他灭活病毒疫苗的生产。
Inactivated vaccines based on cell culture are very useful in the prevention and control of many diseases. The most popular strategy for the production of inactivated vaccines is based on monkey-derived Vero cells, which results in high productivity of the virus but has a certain carcinogenic risk due to non-human DNA contamination. Since human diploid cells, such as MRC-5 cells, can produce a safer vaccine, efforts to develop a strategy for inactivated vaccine production using these cells have been investigated using MRC-5 cells. However, most viruses do not replicate efficiently in MRC-5 cells. In this study, we found that rabies virus (RABV) infection activated a robust interferon (IFN)-β response in MRC-5 cells but almost none in Vero cells, suggesting that the IFN response could be a key limiting factor for virus production. Treatment of the MRC-5 cells with IFN inhibitors increased RABV titers by 10-fold. Additionally, the RABV titer yield was improved five-fold when using IFN receptor 1 (IFNAR1) antibodies. As such, we established a stable IFNAR1-deficient MRC-5 cell line (MRC-5IFNAR1−), which increased RABV production by 6.5-fold compared to normal MRC-5 cells. Furthermore, in a pilot-scale production in 1500 square centimeter spinner flasks, utilization of the MRC-5IFNAR1− cell line or the addition of IFN inhibitors to MRC cells increased RABV production by 10-fold or four-fold, respectively. Thus, we successfully established a human diploid cell-based pilot scale virus production platform via inhibition of IFN response for rabies vaccines, which could also be used for other inactivated virus vaccine production.
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影响因子：
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通讯作者：
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作者：
KITALA, PM;LINDQVIST, KJ;OLSVIK, O
通讯作者：
OLSVIK, O
DOI：
10.20506/rst.37.2.2812
发表时间：
2018-08-01
影响因子：
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作者：
Fehlner-Gardiner, C.
通讯作者：
Fehlner-Gardiner, C.
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Conzelmann, KK