Access to Faster Eukaryotic Cell Labeling with Encoded Tetrazine Amino Acids.
Access to Faster Eukaryotic Cell Labeling with Encoded Tetrazine Amino Acids.
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DOI：
10.1021/jacs.9b11520
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发表时间：
2020-04-22
影响因子：
15
通讯作者：
Mehl RA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Jang HS;Jana S;Blizzard RJ;Meeuwsen JC;Mehl RA
在活的真核细胞中标记生物分子受到组分稳定性低和反应速率慢的限制。我们发现，蛋白质中基因编码的四嗪氨基酸与sTCO试剂的反应速率达到8×104 M− 1 s −1，使其成为真核系统中最快的位点特异性生物正交标记。我们证明了四嗪氨基助剂在蛋白质上是稳定的，并且能够用sTCO试剂进行定量标记。这种连接的异常高的反应速率使标记浓度最小化，允许亚化学计量的体内真核蛋白标记，其中标记的浓度小于蛋白的浓度。这种方法提供了对蛋白质标签的组成和稳定性的前所未有的控制。我们预期该系统将对标记和成像研究产生广泛的影响，因为它可以用于所有通常正交的PylRS/tRNA对。
Labeling of biomolecules in live eukaryotic cells has been limited by low component stability and slow reaction rates. We show that genetically encoded tetrazine amino acids in proteins reach reaction rates of 8×104 M−1s−1 with sTCO reagents, making them the fastest site-specific bioorthogonal labels in eukaryotic systems. We demonstrate that tetrazine amino aids are stable on proteins and are capable of quantitative labeling with sTCO reagents. The exceptionally high reaction rate of this ligation minimizes label concentration, allowing for sub-stochiometric in vivo eukaryotic protein labeling where the concentration of the label is less than the concentration of the protein. This approach offers unprecedented control over the composition and stability of the protein tag. We anticipate that this system will have a broad impact on labeling and imaging studies because it can be used where all generally orthogonal PylRS/tRNA pairs are employed.
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影响因子：
8.4
作者：
Fang Y;Zhang H;Huang Z;Scinto SL;Yang JC;Am Ende CW;Dmitrenko O;Johnson DS;Fox JM
通讯作者：
Fox JM
DOI：
10.1073/pnas.1309584110
发表时间：
2013-07-16
影响因子：
11.1
作者：
Chatterjee, Abhishek;Xiao, Han;Schultz, Peter G.
通讯作者：
Schultz, Peter G.
影响因子：
15
作者：
Seitchik, Jason L.;Peeler, Jennifer C.;Taylor, Michael T.;Blackman, Melissa L.;Rhoads, Timothy W.;Cooley, Richard B.;Refakis, Christian;Fox, Joseph M.;Mehl, Ryan A.
通讯作者：
Mehl, Ryan A.
影响因子：
15
作者：
Peng T;Hang HC
通讯作者：
Hang HC
影响因子：
4.6
作者：
Hohl, Adrian;Karan, Ram;Eppinger, Jorg
通讯作者：
Eppinger, Jorg