Capillary Zone Electrophoresis-Electron-Capture Collision-Induced Dissociation on a Quadrupole Time-of-Flight Mass Spectrometer for Top-Down Characterization of Intact Proteins.
Capillary Zone Electrophoresis-Electron-Capture Collision-Induced Dissociation on a Quadrupole Time-of-Flight Mass Spectrometer for Top-Down Characterization of Intact Proteins.
复制标题
毛细管区带电泳-四极杆飞行时间质谱仪上电子捕获碰撞诱导解离用于完整蛋白质的自上而下表征。
DOI：
10.1021/jasms.0c00484
复制
发表时间：
2021-06-02
影响因子：
3.2
通讯作者：
Sun L
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Shen X;Xu T;Hakkila B;Hare M;Wang Q;Wang Q;Beckman JS;Sun L
基于质谱（MS）的变性自上而下蛋白质组学（dTDP）需要高容量分离和广泛的蛋白质组的气相裂解。在此，我们耦合毛细管区带电泳（CZE）的电子捕获碰撞诱导解离（ECciD）的Agilent 6545 XT四极杆飞行时间（Q-TOF）质谱仪上的dTDP的第一次。在ECciD过程中，首先使用ECD使蛋白质离子片段化，然后通过施加CID电位进一步活化和片段化。在这项初步研究中，我们优化了小蛋白质（低于20 kDa）的CZE-ECciD方法，考虑了用于片段化的蛋白质母离子的电荷状态和应用于最大化蛋白质骨架切割覆盖率和序列信息片段离子数量的CID电位。CZE-ECciD Q-TOF平台在靶向MS/MS模式下的单次CZE-MS/MS运行中为三种低于20 kDa的标准蛋白提供了广泛的骨架切割覆盖率，包括泛素（97%，+7，8.6 kDa），超氧化物歧化酶（SOD，87%，+17，16 kDa）和肌红蛋白（90%，+16，17 kDa）。CZE-ECciD方法产生小蛋白质的可比切割覆盖率（即，肌红蛋白）与直接输注MS研究，使用电子转移解离（ETD），活化离子-ETD，以及ETD和碰撞的组合为基础的高端轨道阱质谱裂解。结果使CZE-ECciD成为dTDP的新工具，以增强蛋白质型的分离和气相裂解。
Mass spectrometry (MS)-based denaturing top-down proteomics (dTDP) requires high-capacity separation and extensive gas-phase fragmentation of proteoforms. Herein, we coupled capillary zone electrophoresis (CZE) to electron-capture collision-induced dissociation (ECciD) on an Agilent 6545 XT quadrupole time-of-flight (Q-TOF) mass spectrometer for dTDP for the first time. During ECciD, the protein ions were first fragmented using ECD, followed by further activation and fragmentation by applying a CID potential. In this pilot study, we optimized the CZE-ECciD method for small proteins (lower than 20 kDa) regarding the charge state of protein parent ions for fragmentation and the CID potential applied to maximize the protein backbone cleavage coverage and the number of sequence-informative fragment ions. The CZE-ECciD Q-TOF platform provided extensive backbone cleavage coverage for three standard proteins lower than 20 kDa from only single charge states in a single CZE-MS/MS run in the targeted MS/MS mode, including ubiquitin (97%, +7, 8.6 kDa), superoxide dismutase (SOD, 87%, +17, 16 kDa), and myoglobin (90%, +16, 17 kDa). The CZE-ECciD method produced comparable cleavage coverage of small proteins (i.e., myoglobin) with direct-infusion MS studies using electron transfer dissociation (ETD), activated ion-ETD, and combinations of ETD and collision-based fragmentation on high-end orbitrap mass spectrometers. The results render CZE-ECciD a new tool for dTDP to enhance both separation and gas-phase fragmentation of proteoforms.
登录
查看更多内容
影响因子：
7.4
作者：
Lubeckyj RA;McCool EN;Shen X;Kou Q;Liu X;Sun L
通讯作者：
Sun L
影响因子：
7.4
作者：
Chen D;Lubeckyj RA;Yang Z;McCool EN;Shen X;Wang Q;Xu T;Sun L
通讯作者：
Sun L
影响因子：
7.4
作者：
Chen B;Brown KA;Lin Z;Ge Y
通讯作者：
Ge Y
一种集成的天然质谱和自上而下的蛋白质组学方法，该方法将序列连接到大分子复合物的结构和功能。
影响因子：
21.8
作者：
Li H;Nguyen HH;Ogorzalek Loo RR;Campuzano IDG;Loo JA
通讯作者：
Loo JA
影响因子：
2.8
作者：
Kjeldsen, F;Haselmann, KF;Zubarev, RA
通讯作者：
Zubarev, RA