Self‐association of EPEC intimin mediated by the β‐barrel‐containing anchor domain: a role in clustering of the Tir receptor
Self‐association of EPEC intimin mediated by the β‐barrel‐containing anchor domain: a role in clustering of the Tir receptor
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含有 β-桶的锚结构域介导的 EPEC intimin 自缔合：在 Tir 受体聚集中的作用
作者：
T. Touzé;Richard D Hayward;J. Eswaran;J. Leong;V. Koronakis
外膜紧密蛋白通过其Tir受体在哺乳动物靶细胞膜上指导肠致病性大肠杆菌（EPEC）的附着。Tir的磷酸化触发局部肌动蛋白聚合和“基座样”伪足的形成。我们证明了内膜蛋白包含三个结构域，一个柔性的N末端（残基40-188），一个中央膜整合的β桶（189-549），和一个紧密折叠的Tir结合结构域（550-939）。通过电子显微镜显示，内膜形成具有约7 nm外径和电子致密核心的环状结构，并在平面脂质双层中形成50皮西门子电导的通道。 凝胶过滤、多角度光散射和交联表明，该中心β桶膜锚定结构域指导内膜二聚化。等温滴定量热法揭示了二聚体的内膜蛋白和Tir之间2：1化学计量的高亲和力、单结合位点相互作用，并且建模表明这种相互作用决定了受体聚集的网状阵列样超结构。 为了支持这一模型，由含内膜蛋白的脂蛋白体在Tir预处理的培养细胞中诱导的肌动蛋白重排依赖于内膜蛋白和Tir的浓度，并且与成簇的磷酸化Tir共定位。
Outer membrane intimin directs attachment of enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) via its Tir receptor in mammalian target cell membranes. Phosphorylation of Tir triggers local actin polymerization and the formation of ‘pedestal‐like’ pseudopods. We demonstrate that the intimin protein contains three domains, a flexible N‐terminus (residues 40–188), a central membrane‐integrated β‐barrel (189–549), and a tightly folded Tir‐binding domain (550–939). Intimin was shown by electron microscopy to form ring‐like structures with a ∼7 nm external diameter and an electron dense core, and to form channels of 50picoSiemens conductance in planar lipid bilayers. Gel filtration, multiangle light scattering and cross‐linking showed that this central β‐barrel membrane‐anchoring domain directs intimin dimerization. Isothermal titration calorimetry revealed a high affinity, single‐binding site interaction of 2 : 1 stoichiometry between dimeric intimin and Tir, and modelling suggests that this interaction determines a reticular array‐like superstructure underlying receptor clustering. In support of this model, actin rearrangement induced in Tir‐primed cultured cells by intimin‐containing proteoliposomes was dependent on the concentration of both intimin and Tir, and co‐localized with clustered phosphorylated Tir.
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影响因子：
2.9
作者：
SREERAMA, N;WOODY, RW
通讯作者：
WOODY, RW
DOI：
10.1073/pnas.87.20.7839
发表时间：
1990-10-01
影响因子：
11.1
作者：
JERSE, AE;YU, J;KAPER, JB
通讯作者：
KAPER, JB
影响因子：
2.9
作者：
Sreerama, N;Woody, RW
通讯作者：
Woody, RW
体外合成的大肠杆菌外膜 OmpF 孔蛋白的三聚化。
DOI：
--
发表时间：
1991
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Sen,K;Nikaido,H
通讯作者：
Nikaido,H