Effect of nickel(II) on DNA-protein binding, thymidine incorporation, and sedimentation pattern of chromatin fractions from intact mammalian cells.
Effect of nickel(II) on DNA-protein binding, thymidine incorporation, and sedimentation pattern of chromatin fractions from intact mammalian cells.
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镍 (II) 对 DNA-蛋白质结合、胸苷掺入以及完整哺乳动物细胞染色质组分沉降模式的影响。
DOI：
10.1002/jbt.2570020103
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发表时间：
1987
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Costa,M
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Patierno,SR;Sugiyama,M;Costa,M
研究了镍（II）在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中的核摄取和染色质结合。处理后，镍的胞质核比为5:1，但在24小时和48小时后，这一比例分别降至4:1和2:1，这表明镍在细胞核中比在胞质中保留的时间更长。染色质通过超声和离心分离成快速沉淀、镁不溶性和镁不溶性组分。镁不溶性组分比镁溶性组分或快沉组分结合更多的镍离子，并且保留金属的时间更长。用氯化镍（NiCl2）处理细胞减少了镁不溶性部分的DNA数量，但增加了快速沉积染色质部分的DNA数量。与未处理细胞相比，从镍处理细胞中分离出的镁不溶性部分每毫克DNA含有约10倍的[35‐S]‐蛋氨酸标记蛋白。从镍处理的细胞中分离出的镁溶性和快速沉积部分，每毫克DNA中[35‐S] -蛋氨酸标记蛋白的含量没有类似的增加。与未处理的细胞相比，镍处理抑制了[14‐C]‐胸苷并入总DNA的30%。然而，从镍处理的细胞中提取的镁不溶性染色质部分胸苷结合增加了10到20倍，而其他染色质部分没有显示胸苷结合增加。这些发现表明，镍诱导染色质构象的广泛改变，并优先与染色质的镁不溶性成分相互作用。
Nuclear uptake and chromatin binding of nickel(II) was investigated in Chinese hamster ovary (CHO) cells. The cytoplasmic:nuclear ratio of nickel immediately following treatment was 5:1, but by 24 and 48 hours this ratio decreased to 4:l and 2:1, respectively, indicating that nickel is retained longer in the nucleus than cytoplasmic nickel. Chromatin was fractionated by sonication and centrifugation into fast‐sedimenting, magnesium‐insoluble, or magnesiumsoluble components. The magnesium‐insoluble portion bound more nickel ions and retained the metal longer than either the magnesium‐soluble or the fastsedimenting fractions. Treatment of cells with nickel chloride (NiCl2) decreased the amount of DNA in the magnesium‐insoluble fraction but increased the amount of DNA in the fast‐ sedimenting chromatin fraction. The magnesium‐insoluble fraction isolated from nickel‐treated cells contained approximately ten times more [35‐S]‐methionine–labeled protein per milligram DNA compared with untreated cells. The magnesium‐soluble and the fast‐sedimenting fractions isolated from the nickel‐treated cells did not exhibit a similar increase in [35‐S]‐methionine–labeled protein per milligram of DNA. Nickel treatment suppressed [14‐C]‐thymidine incorporation into total DNA by 30% compared with untreated cells. However, the magnesium‐insoluble chromatin fraction from nickel‐treated cells had a tenfold to 20‐fold increase in thymidine incorporation, while the other chromatin fractions did not exhibit an increase in thymidine incorporation. These findings indicate that nickel induced widespread alterations in chromatin conformation and preferentially interacted with an Mg‐insoluble component of chromatin.
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