Direct method for detecting small quantities of hepatitis B virus DNA in serum and plasma using the polymerase chain reaction.
Direct method for detecting small quantities of hepatitis B virus DNA in serum and plasma using the polymerase chain reaction.
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使用聚合酶链式反应直接检测血清和血浆中少量乙型肝炎病毒 DNA 的方法。
DOI：
10.1172/jci114326
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发表时间：
1989
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Mimms,LT
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zeldis,JB;Lee,JH;Mamish,D;Finegold,DJ;Sircar,R;Ling,Q;Knudsen,PJ;Kuramoto,IK;Mimms,LT
血清成分抑制 DNA 聚合酶，从而避免通过聚合酶链式反应 (PCR) 直接检测血清病毒 DNA 序列。这就需要在进行 PCR 之前从血清中提取核酸，并导致灵敏度损失。通过将病毒吸附到固体表面（微量离心管或抗体包被的微粒），然后用蛋白酶 K 消化，可以通过 PCR 直接检测到每 200 微升血清中少至 3 个病毒，无需提取核酸。灵敏度取决于吸附表面的表面积，并且通过吸附表面上的抗体来提高灵敏度。扩增的DNA片段的核酸序列可以通过双脱氧法直接测定。在 HBsAg+ 自愿献血者的 24 份血浆样本中，7 份通过斑点印迹测定检测到 HBV DNA，7 份通过液体杂交检测，9 份通过 PCR 检测。 PCR 检测到每个样本中的 DNA 经另一次检测呈阳性。对两名急性自限性乙型肝炎患者的系列样本进行分析，发现通过 PCR 方法可在 HBV DNA 之前检测到 HBsAg 和前 S2 抗原血症。这些结果表明，在急性肝炎期间，表面抗原血症可能先于病毒血症。
Serum components inhibit DNA polymerase, thereby obviating direct detection of serum viral DNA sequences by the polymerase chain reaction (PCR). This has necessitated extraction of nucleic acid from sera before performing PCR and has resulted in loss of sensitivity. By adsorbing virus to a solid surface (microcentrifuge tubes or antibody coated microparticles) followed by proteinase K digestion, as little as three viruses per 200 microliters serum may be directly detected by PCR without nucleic acid extraction. The sensitivity is dependent on the surface area of the adsorptive surface and is increased by having antibodies on the adsorptive surface. The nucleic acid sequence of the amplified DNA fragments may be directly determined by the dideoxy method. Of 24 plasma samples from HBsAg+ volunteer blood donors, HBV DNA was detected in 7 by dot blot assay, 7 by liquid hybridization, and 9 by PCR. PCR detected DNA in every sample that was positive by another assay. Analysis of serial samples of two patients with acute self-limited hepatitis B found detectable HBsAg and pre-S2 antigenemia before HBV DNA by the PCR method. These results suggest that surface antigenemia may precede viremia during acute hepatitis.Images
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