Human Argonaute3 has slicer activity.
Human Argonaute3 has slicer activity.
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DOI：
10.1093/nar/gkx916
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发表时间：
2017-11-16
影响因子：
14.9
通讯作者：
Nakanishi K
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Park MS;Phan HD;Busch F;Hinckley SH;Brackbill JA;Wysocki VH;Nakanishi K
在四个人类 Argonaute (AGO) 旁系同源物中，只有 AGO2 被证明具有切片活性。其他基因（AGO1、AGO3 和 AGO4）被认为与 microRNA 组装形成独立于切片器的效应复合物，该复合物结合靶标 mRNA，并通过翻译抑制和去腺苷酸化而不是裂解来沉默基因表达。在这里，我们报告装载有 miR-20a 的重组 AGO3 切割互补的靶 RNA，而装载有 let-7a、miR-19b 或 miR-16 的 AGO3 则不会，表明 AGO3 具有切片活性，但该活性取决于指导 RNA。我们使用嵌合向导进行的切割测定揭示了种子序列对 AGO3 活性的重要性，这具体取决于种子后的序列。与 AGO2 不同，AGO3 的靶标切割需要 5'- 和 3'- 侧翼区域。我们的 3.28 Å 晶体结构表明，AGO3 形成了一个与 AGO2 相似的完整活性位点，但不是明确的核酸结合通道。这些结果表明 AGO3 也具有切片活性，但具有更复杂的底物要求，解释了 AGO3 在其整个进化过程中保留了必要的催化残基的观察结果。此外，我们的结构激发了这样的想法：AGO3 的底物结合通道及其细胞功能可能受到辅助蛋白的调节。
Of the four human Argonaute (AGO) paralogs, only AGO2 has been shown to have slicer activity. The others (AGO1, AGO3 and AGO4) have been thought to assemble with microRNAs to form slicer-independent effector complexes that bind target mRNAs and silence gene expression through translational repression and deadenylation but not cleavage. Here, we report that recombinant AGO3 loaded with miR-20a cleaves complementary target RNAs, whereas AGO3 loaded with let-7a, miR-19b or miR-16 does not, indicating that AGO3 has slicer activity but that this activity depends on the guide RNA. Our cleavage assays using chimeric guides revealed the significance of seed sequence for AGO3 activity, which depends specifically on the sequence of the post-seed. Unlike AGO2, target cleavage by AGO3 requires both 5′- and 3′-flanking regions. Our 3.28 Å crystal structure shows that AGO3 forms a complete active site mirroring that of AGO2, but not a well-defined nucleic acid-binding channel. These results demonstrating that AGO3 also has slicer activity but with more intricate substrate requirements, explain the observation that AGO3 has retained the necessary catalytic residues throughout its evolution. In addition, our structure inspires the idea that the substrate-binding channel of AGO3 and consequently its cellular function, may be modulated by accessory proteins.
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影响因子：
7.3
作者：
Nakanishi, Kotaro
通讯作者：
Nakanishi, Kotaro
影响因子：
14.9
作者：
Kozomara A;Griffiths-Jones S
通讯作者：
Griffiths-Jones S
影响因子：
64.5
作者：
Elkayam E;Kuhn CD;Tocilj A;Haase AD;Greene EM;Hannon GJ;Joshua-Tor L
通讯作者：
Joshua-Tor L
DOI：
10.1107/s0907444909052925
发表时间：
2010-02
期刊：
Acta crystallographica. Section D, Biological crystallography
影响因子：
--
作者：
Adams PD;Afonine PV;Bunkóczi G;Chen VB;Davis IW;Echols N;Headd JJ;Hung LW;Kapral GJ;Grosse-Kunstleve RW;McCoy AJ;Moriarty NW;Oeffner R;Read RJ;Richardson DC;Richardson JS;Terwilliger TC;Zwart PH
通讯作者：
Zwart PH
影响因子：
56.9
作者：
Liu, JD;Carmell, MA;Hannon, GJ
通讯作者：
Hannon, GJ