Targeted disruption of DNMT1, DNMT3A and DNMT3B in human embryonic stem cells.
Targeted disruption of DNMT1, DNMT3A and DNMT3B in human embryonic stem cells.
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靶向破坏人胚胎干细胞中的 DNMT1、DNMT3A 和 DNMT3B。
DOI：
10.1038/ng.3258
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发表时间：
2015-05
期刊：
影响因子：
30.8
通讯作者：
Meissner, Alexander
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Liao, Jing;Karnik, Rahul;Gu, Hongcang;Ziller, Michael J.;Clement, Kendell;Tsankov, Alexander M.;Akopian, Veronika;Gifford, Casey A.;Donaghey, Julie;Galonska, Christina;Pop, Ramona;Reyon, Deepak;Tsai, Shengdar Q.;Mallard, William;Joung, J. Keith;Rinn, John L.;Gnirke, Andreas;Meissner, Alexander
DNA甲基化是调控基因表达和维持基因组完整性的关键表观遗传修饰。在这里，我们使用CRISPR/Cas9基因组编辑灭活了人类胚胎干细胞（ESC）中所有三种催化活性的DNA甲基转移酶，以进一步研究它们的作用和基因组靶点。单独破坏DNMT 3A或DNMT 3B，以及串联破坏两种酶，产生了活的多能细胞系，其对DNA甲基化景观具有不同的影响，如通过全基因组亚硫酸氢盐测序所评估的。令人惊讶的是，与小鼠相反，DNMT 1的缺失导致人ESC中的快速细胞死亡。为了克服直接致死性，我们产生了多西环素（DOX）响应性tTA-DNMT 1 * 拯救系，并容易获得纯合DNMT 1突变系。然而，DOX介导的外源性DNMT 1 * 的抑制启动DNA甲基化的快速、全面丧失，随后是广泛的细胞死亡。我们的数据提供了DNMT突变ESCs的全面表征，包括其靶点的单碱基全基因组图谱。
DNA methylation is a key epigenetic modification involved in regulating gene expression and maintaining genomic integrity. Here we inactivated all three catalytically active DNA methyltransferases in human embryonic stem cells (ESCs) using CRISPR/Cas9 genome editing to further investigate their roles and genomic targets. Disruption of DNMT3A or DNMT3B individually, as well as of both enzymes in tandem, creates viable, pluripotent cell lines with distinct effects on their DNA methylation landscape as assessed by whole-genome bisulfite sequencing. Surprisingly, in contrast to mouse, deletion of DNMT1 resulted in rapid cell death in human ESCs. To overcome the immediate lethality, we generated a doxycycline (DOX) responsive tTA-DNMT1* rescue line and readily obtained homozygous DNMT1 mutant lines. However, DOX-mediated repression of the exogenous DNMT1* initiates rapid, global loss of DNA methylation, followed by extensive cell death. Our data provide a comprehensive characterization of DNMT mutant ESCs, including single base genome-wide maps of their targets.
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影响因子：
5.6
作者：
Horii T;Tamura D;Morita S;Kimura M;Hatada I
通讯作者：
Hatada I
影响因子：
64.5
作者：
Gifford CA;Ziller MJ;Gu H;Trapnell C;Donaghey J;Tsankov A;Shalek AK;Kelley DR;Shishkin AA;Issner R;Zhang X;Coyne M;Fostel JL;Holmes L;Meldrim J;Guttman M;Epstein C;Park H;Kohlbacher O;Rinn J;Gnirke A;Lander ES;Bernstein BE;Meissner A
通讯作者：
Meissner A
影响因子：
2.3
作者：
Barra V;Schillaci T;Lentini L;Costa G;Di Leonardo A
通讯作者：
Di Leonardo A
DOI：
10.1073/pnas.0604602103
发表时间：
2006-09-19
影响因子：
11.1
作者：
Egger, Gerda;Jeong, Shinwu;Liang, Gangning
通讯作者：
Liang, Gangning
影响因子：
46.9
作者：
通讯作者：
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