Use of "loss-of-contact" substitutions to identify residues involved in an amino acid-base pair contact: effect of substitution of Gln18 of lac repressor by Gly, Ser, and Leu.
Use of "loss-of-contact" substitutions to identify residues involved in an amino acid-base pair contact: effect of substitution of Gln18 of lac repressor by Gly, Ser, and Leu.
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使用“失去接触”取代来识别参与氨基酸-碱基对接触的残基：用 Gly、Ser 和 Leu 取代 lac 阻遏物的 Gln18 的效果。
DOI：
--
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发表时间：
1985
影响因子：
4.4
通讯作者：
R. Ebright
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
R. Ebright
本文介绍了一种鉴定Lac阻遏蛋白（LacR）的一个可能的接触氨基酸与Lac操纵子（lacO）的哪一个碱基对相互作用的方法。该程序是消除所研究的氨基酸与DNA接触的能力，然后确定在哪个碱基对（如果有的话）特异性被消除。为了实施该程序，已经构建了四组大肠杆菌K-12菌株。这些菌株允许：（i）分别用Gly、Ser、Leu或Gln取代LacR的选定氨基酸，和（ii）分析所得取代的LacR相对于lacO的碱基对5、6、7、8、9和10的特异性。该方法已应用于LacR的Gln 18。初步数据表明，LacR（Gln 18-Gly）不能区分lacO第7位的O+碱基对G：C和Oc碱基对T：A（KDOc/KDO+ = 0.93）。相比之下，LacR（Gln 18----Gly）区分O+和Oc的因子为13至23。用LacR（Gln 18-Ser）和LacR（Gln 18-Leu）获得了相同的定性结果模式。因此，我建议Gln 18接触lacO的碱基对7。这一建议与Ebright，R.蛋白质结构、折叠和设计D. Oxender编辑，Alan R.利斯，纽约（1985年），出版中。
A procedure to identify which base pair of lac operator (lacO) a suspected contacting amino acid of Lac repressor (LacR) interacts with is presented. The procedure is to eliminate the ability of the amino acid under study to contact DNA, and then to determine at which base pair--if any--specificity is eliminated. To implement this procedure, four sets of Escherichia coli K-12 strains have been constructed. These strains permit: (i) the substitution of a selected amino acid of LacR by, respectively, Gly, Ser, Leu, or Gln, and (ii) the analysis of the specificity of the resulting substituted LacR with respect to base pairs 5, 6, 7, 8, 9, and 10 of lacO. This procedure has been applied to Gln18 of LacR. The preliminary data indicate that LacR (Gln18----Gly) is unable to distinguish between the O+ base pair G:C and the Oc base pair T:A at position 7 of lacO (KDOc/KDO+ = 0.93). In contrast, LacR(Gln18----Gly) discriminates O+ from Oc by a factor of 13 to 23 at each other position. The same qualitative pattern of results was obtained with LacR(Gln18----Ser) and LacR (Gln18----Leu). Therefore, I propose that Gln18 contacts base pair 7 of lacO. This proposal is consistent with the contact predicted in Ebright, R. in Protein Structure, Folding, and Design. D. Oxender ed., Alan R. Liss, New York (1985), in press.
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分解代谢物基因激活剂和 cro 阻遏蛋白的 DNA 结合域的结构相似性。
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Miller,JH
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发表时间：
1982
影响因子：
11.1
作者：
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通讯作者：
Takeda,Y