Probing dynein and kinesin stepping with mechanical manipulation in a living cell.
Probing dynein and kinesin stepping with mechanical manipulation in a living cell.
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DOI：
10.1002/cphc.200900113
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发表时间：
2009-07-13
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Xie XS
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Sims PA;Xie XS
我们报告了一种无标记的方法，用于同时进行光学操作和跟踪内源性脂滴作为活体哺乳动物细胞中活跃运输的货物，时间分辨率为亚毫秒。使用EM-CCD摄像机作为高灵敏度的象限探测器，我们可以在已知的力载荷下检测由动力蛋白和动蛋白驱动的货物的台阶。我们可以区分单个和多个电动货物，并表明进货和出货的失速力是相似的。通过将可观察到的失速力与检测单个步骤的能力相结合，我们可以表征不同力模式下由动蛋白和动力蛋白驱动的主动运输。
We report a label-free assay for simultaneous optical manipulation and tracking of endogenous lipid droplets as actively transported cargoes in a living mammalian cell with sub-millisecond time resolution. Using an EM-CCD camera as a highly sensitive quadrant detector, we can detect steps of dynein- and kinesin-driven cargoes under known force loads. We can distinguish single and multiple motor-driven cargoes and show that the stall forces for inward and outward transported cargoes are similar. By combining the stall force observable with the ability to detect individual steps, we can characterize kinesin- and dynein-driven active transport in different force regimes.
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