Functional analysis of human cytomegalovirus pUS28 mutants in infected cells.

Functional analysis of human cytomegalovirus pUS28 mutants in infected cells.
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受感染细胞中人巨细胞病毒 pUS28 突变体的功能分析。

DOI:
10.1099/vir.0.83226-0
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发表时间:
2008
期刊:
The Journal of general virology
影响因子:
--
通讯作者:
Miller,WilliamE
Miller,WilliamE
中科院分区:
--
文献类型:
--
作者:
Stropes,MelissaPM;Miller,WilliamE

文献摘要

参考文献

被引文献

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人巨细胞病毒(HCMV)编码的病毒G蛋白偶联受体pUS28参与一系列生物学效应,包括细胞迁移和增殖。利用FIX-BAC(细菌人工染色体,来源于HCMV临床分离物VR1814)和λ红重组技术,我们生成了表达野生型pUS28 (FLAG-US28 /WT)、g蛋白偶联缺陷型pUS28 (FLAG-US28 /R129A)和趋化因子结合结构域缺陷型pUS28 (FLAG-US28 /ΔN)的氨基末端flag标记型HCMV重组体。感染FLAG-US28 /R129A病毒未能诱导肌醇磷酸积累,这表明在HCMV感染期间,g蛋白偶联对于pUS28向磷脂酶C-β(PLC-β)信号传导至关重要。FLAG-US28 /ΔN病毒诱导的PLC-β信号传导水平约为FLAG-US28 /WT病毒诱导的80%,这表明在感染细胞中,pus28诱导的PLC-β信号传导不需要n端趋化因子结合结构域。本文提供的数据首次描述了hcmv感染细胞中几种关键pUS28突变体的功能分析。阐明感染过程中pUS28信号的机制将为HCMV的发病机制提供重要的见解。
The human cytomegalovirus (HCMV)-encoded viral G protein-coupled receptor pUS28 contributes to an array of biological effects, including cell migration and proliferation. Using FIX-BAC (bacterial artificial chromosome, derived from the HCMV clinical isolate VR1814) and lambda red recombination techniques, we generated HCMV recombinants expressing amino-terminally FLAG-tagged versions of wild-type pUS28 (FLAG–US28/WT), G-protein coupling deficient pUS28 (FLAG–US28/R129A) and chemokine-binding domain deficient pUS28 (FLAG–US28/ΔN). Infection with the FLAG–US28/R129A virus failed to induce inositol phosphate accumulation, indicating that G-protein coupling is essential for pUS28 signalling to phospholipase C-β(PLC-β) during HCMV infection. The FLAG–US28/ΔN virus induced about 80 % of the level of PLC-βsignalling induced by the FLAG–US28/WT virus, demonstrating that the N-terminal chemokine-binding domain is not required for pUS28-induced PLC-βsignalling in infected cells. The data presented here are the first to describe the functional analyses of several key pUS28 mutants in HCMV-infected cells. Elucidating the mechanisms by which pUS28 signals during infection will provide important insights into HCMV pathogenesis.
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