CODON OPTIMIZATION INCREASES HUMAN KALLISTATIN EXPRESSION IN Escherichia coli
CODON OPTIMIZATION INCREASES HUMAN KALLISTATIN EXPRESSION IN Escherichia coli
复制标题
密码子优化增加了大肠杆菌中人类 Kallistatin 的表达
DOI：
10.1080/10826068.2012.712079
复制
发表时间：
2013-01
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Gao G
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Dai Z;Chen Y;Qi W;Huang L;Zhang Y;Zhou T;Yang X;Gao G
一个独特的丝氨酸蛋白酶抑制剂，激肽，显示血管扩张，抗血管生成，抗炎和抗氧化活性。重组激肽的获得困难和低效率限制了其生物学和病理学功能的广泛研究。本研究采用密码子优化算法对Kalistatin基因进行了重新设计，获得了高产量的重组Kalistatin蛋白。在不改变氨基酸的情况下，针对更合适的大肠杆菌宿主重新设计了激肽抑制素密码子。比较了合成的优化的激肽释放酶抑制剂（opti-kallistatin）和野生型激肽释放酶抑制剂（wt-kallistatin）之间的碱基组成和GC%含量。使用Ni-NTA His结合树脂通过快速蛋白质液相色谱（FPLC）纯化优化的激肽释放酶抑制剂和wt-激肽释放酶抑制剂。通过考马斯亮蓝染色、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western印迹分析来确认激肽释放酶抑制剂的身份和纯度。优化的激肽释放酶蛋白产量（2.09 ± 0.23 mg/L）是野生型激肽释放酶蛋白产量（1.05 ± 0.2 mg/L）的1.2倍。这些结果表明，在大肠杆菌中更常见的密码子优化。大肠杆菌宿主的产量显著增加了异源人蛋白的产量。这种方法将显着促进进一步的研究，在体外和体内的激肽。
A unique serpin, kallistatin, displays vasodilatory, antiangiogenic, anti-inflammatory, and antioxidant activity. Difficulty and low efficacy of obtaining recombinant kallistatin limit the wide investigation of its biological and pathological function. The present study employed a codon optimization algorithm to redesign the kallistatin gene and achieved a high yield of recombinant kallistatin protein. The kallistatin codons were redesigned for a more suitable Escherichia coli host without altering amino acids. Base composition and GC% content were compared between synthetic optimized kallistatin (opti-kallistatin) and wild-type kallistatin (wt-kallistatin). Both opti-kallistatin and wt-kallistatin were purified using Ni-NTA His-binding resins through fast protein liquid chromatography (FPLC). The identity and purity of kallistatin were confirmed by Coomassie blue staining, sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), and Western blot analysis. The output of opti-kallistatin protein was ∼2-fold increase (2.09 ± 0.23 mg/L) compared to wt-kallistatin (1.05 ± 0.2 mg/L). These results suggest that more common codon optimization in the E. coli host significantly increases the yield of heterologous human protein yields. This approach will remarkably facilitate the further investigation of kallistatin in vitro and in vivo.
登录
查看更多内容
DOI：
10.1016/s0021-9258(19)40178-6
发表时间：
1990-01
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
H. Rubin;Z. M. Wang;E. Nickbarg;S. Mclarney;N. Naidoo;O. Schoenberger;J. Johnson;B. Cooperman
通讯作者：
H. Rubin;Z. M. Wang;E. Nickbarg;S. Mclarney;N. Naidoo;O. Schoenberger;J. Johnson;B. Cooperman
影响因子：
5.5
作者：
Miao, RQ;Chen, V;Chao, J
通讯作者：
Chao, J
影响因子：
--
作者：
Wang, CR;Chen, SY;Chao, J
通讯作者：
Chao, J
影响因子：
15.9
作者：
JAFFE, EA;NACHMAN, RL;MINICK, CR
通讯作者：
MINICK, CR
影响因子：
4
作者：
Cai, WB;Ma, JF;Gao, GQ
通讯作者：
Gao, GQ