Microinjection of antisense oligonucleotides into living mouse testis enables lncRNA function study.
Microinjection of antisense oligonucleotides into living mouse testis enables lncRNA function study.
复制标题
将反义寡核苷酸显微注射到活体小鼠睾丸中可以进行 lncRNA 功能研究。
DOI：
10.1186/s13578-021-00717-y
复制
发表时间：
2021-12-17
影响因子：
7.5
通讯作者：
Zheng K
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chen Z;Ling L;Shi X;Li W;Zhai H;Kang Z;Zheng B;Zhu J;Ye S;Wang H;Tong L;Ni J;Huang C;Li Y;Zheng K
长非编码 RNA (lncRNA) 一直是多种细胞过程持续研究的焦点。 LncRNA 在哺乳动物睾丸中含量丰富，但其生物学功能仍知之甚少。在这里，我们建立了一种基于反义寡核苷酸（ASO）的靶向方法，可以有效地敲除活体小鼠睾丸中的lncRNA。我们克隆了 lncRNA Tsx（睾丸特异性 X 连锁）的全长转录本，并定义了其睾丸定位模式。通过体内生精小管显微注射 ASO 显着降低了细胞核和细胞质中的 Tsx 水平。这种作用持续不少于10天，有利于表型的产生和维持。重要的是，与小干扰 RNA (siRNA) 相比，ASO 在消除核 Tsx 方面表现更好，且效果持续时间更长。除了观察到注射 ASO 后凋亡的生殖细胞数量增加（这概括了 Tsx 敲除的记录描述）之外，我们还发现减数分裂精母细胞的特定损失，尽管总体上对减数分裂和男性生育力没有影响。我们的研究详细描述了 Tsx 的特征，并说明 ASO 作为在精子发生过程中功能性研究 lncRNA 的有利工具。在线版本包含可在 10.1186/s13578-021-00717-y 获取的补充材料。
Long non-coding RNAs (lncRNAs) have been the focus of ongoing research in a diversity of cellular processes. LncRNAs are abundant in mammalian testis, but their biological function remains poorly known. Here, we established an antisense oligonucleotides (ASOs)-based targeting approach that can efficiently knock down lncRNA in living mouse testis. We cloned the full-length transcript of lncRNA Tsx (testis-specific X-linked) and defined its testicular localization pattern. Microinjection of ASOs through seminiferous tubules in vivo significantly lowered the Tsx levels in both nucleus and cytoplasm. This effect lasted no less than 10 days, conducive to the generation and maintenance of phenotype. Importantly, ASOs performed better in depleting the nuclear Tsx and sustained longer effect than small interfering RNAs (siRNAs). In addition to the observation of an elevated number of apoptotic germ cells upon ASOs injection, which recapitulates the documented description of Tsx knockout, we also found a specific loss of meiotic spermatocytes despite overall no impact on meiosis and male fertility. Our study detailed the characterization of Tsx and illustrates ASOs as an advantageous tool to functionally interrogate lncRNAs in spermatogenesis. The online version contains supplementary material available at 10.1186/s13578-021-00717-y.
登录
查看更多内容
影响因子：
4.5
作者：
Anguera MC;Ma W;Clift D;Namekawa S;Kelleher RJ 3rd;Lee JT
通讯作者：
Lee JT
影响因子：
3.6
作者：
Bao, Jianqiang;Wu, Jingwen;Yan, Wei
通讯作者：
Yan, Wei
影响因子：
5.6
作者：
Lei, Qijing;Pan, Qin;Hua, Jinlian
通讯作者：
Hua, Jinlian
MIWI/piRNA 在小鼠精子发生过程中的翻译激活功能
影响因子：
64.5
作者：
Dai P;Wang X;Gou LT;Li ZT;Wen Z;Chen ZG;Hua MM;Zhong A;Wang L;Su H;Wan H;Qian K;Liao L;Li J;Tian B;Li D;Fu XD;Shi HJ;Zhou Y;Liu MF
通讯作者：
Liu MF
影响因子：
7.7
作者：
Goudarzi, Mehdi;Berg, Kathryn;Schier, Alexander F.
通讯作者：
Schier, Alexander F.