Site-specific isotope labeling of long RNA for structural and mechanistic studies.
Site-specific isotope labeling of long RNA for structural and mechanistic studies.
复制标题
DOI：
10.1093/nar/gkr951
复制
发表时间：
2012-01
影响因子：
14.9
通讯作者：
Tanaka Y
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kawahara I;Haruta K;Ashihara Y;Yamanaka D;Kuriyama M;Toki N;Kondo Y;Teruya K;Ishikawa J;Furuta H;Ikawa Y;Kojima C;Tanaka Y
建立了长RNA分子的位点特异性同位素标记技术。该技术由两个简单的酶促反应组成，即I组自剪接内含子的鸟苷转移反应和与T4 DNA连接酶的连接。反式作用组I自剪接内含子与其外部辅因子“同位素标记的鸟苷5′-磷酸”（5′-GMP）稳定地产生5′-残基标记的RNA片段。这一关键反应与5′-剩余未标记序列的连接相结合，使我们能够以高产率制备位点特异性标记的RNA分子，并通过15 N NMR光谱证实了其产生。这种位点特异性标记的RNA分子可用于检测分子相互作用，并通过核磁共振光谱法以及可能的拉曼光谱法和质谱法来探测催化/结构重要残基的化学特征。
A site-specific isotope labeling technique of long RNA molecules was established. This technique is comprised of two simple enzymatic reactions, namely a guanosine transfer reaction of group I self-splicing introns and a ligation with T4 DNA ligase. The trans-acting group I self-splicing intron with its external cofactor, ‘isotopically labeled guanosine 5′-monophosphate’ (5′-GMP), steadily gave a 5′-residue-labeled RNA fragment. This key reaction, in combination with a ligation of 5′-remainder non-labeled sequence, allowed us to prepare a site-specifically labeled RNA molecule in a high yield, and its production was confirmed with 15N NMR spectroscopy. Such a site-specifically labeled RNA molecule can be used to detect a molecular interaction and to probe chemical features of catalytically/structurally important residues with NMR spectroscopy and possibly Raman spectroscopy and mass spectrometry.
登录
查看更多内容
影响因子：
15
作者：
Dingley, AJ;Peterson, RD;Feigon, J
通讯作者：
Feigon, J
影响因子：
14.9
作者：
BATEY, RT;INADA, M;WILLIAMSON, JR
通讯作者：
WILLIAMSON, JR
影响因子：
14.9
作者：
Kim, I;Muto, Y;Shimura, Y
通讯作者：
Shimura, Y
影响因子：
2.7
作者：
DELAGLIO, F;GRZESIEK, S;BAX, A
通讯作者：
BAX, A
影响因子：
2.7
作者：
Ikawa, Y;Inoue, T
通讯作者：
Inoue, T