Tightly regulated ‘all-in-one’ lentiviral vectors for protection of human hematopoietic cells from anticancer chemotherapy
Tightly regulated ‘all-in-one’ lentiviral vectors for protection of human hematopoietic cells from anticancer chemotherapy
复制标题
严格调控的“一体化”慢病毒载体，用于保护人类造血细胞免受抗癌化疗的影响
DOI：
10.1038/gt.2015.61
复制
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
5.1
通讯作者：
Moritz T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Lachmann N;Brennig S;Hillje R;Schermeier H;Phaltane R;Dahlmann J;Gruh I;Heinz N;Schiedlmeier B;Baum C;Moritz T
基因治疗策略的成功应用可能需要严格调控的转基因表达。沿着这条线，我们描述了一种多西环素（Dox）诱导的“一体化”慢病毒载体设计，其使用pTET-T11（TII）最小启动子和由磷酸甘油酸激酶启动子驱动的反向反式激活蛋白（rtTA 2S-M2），允许严格调节转基因表达（Lv. TII载体）。在基于胞苷脱氨酶（hCDD）的骨髓保护基因治疗的背景下，在人造血细胞中评估载体设计。Dox给药后，在Lv中检测到快速（16-24 h）和剂量依赖性（> 0.04 μg ml-1 Dox）的转基因表达启动。TII. CDD基因修饰的K562细胞以及原代人CD 34+造血细胞中的细胞毒性。重要的是，在两种细胞模型中，在不存在Dox的情况下观察到低背景转基因表达。Dox诱导的hCDD表达的功能性通过Lv的阿糖胞苷（1-β-d-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶，Ara-C）抗性增加> 10倍来证明。TII.⑶ D转导的K562细胞。此外，LV。TII.⑶ D转导的⑶ 34+衍生的骨髓细胞受到高达300 nm Ara-C的保护（对照从50 nm起受影响）。这些数据清楚地证明了我们的自失活慢病毒载体在具有最小背景活性的人造血细胞中诱导稳健的、严格调控的转基因表达的适用性，并突出了我们的构建体在骨髓保护基因治疗策略中的潜力。
Successful application of gene therapy strategies may require stringently regulated transgene expression. Along this line, we describe a doxycycline (Dox)-inducible ‘all-in-one’lentiviral vector design using the pTET-T11 (TII) minimal-promoter and a reverse transactivator protein (rtTA2S-M2) driven by the phosphoglycerate kinase promoter allowing for tight regulation of transgene expression (Lv. TII vectors). Vector design was evaluated in human hematopoietic cells in the context of cytidine deaminase (hCDD)-based myeloprotective gene therapy. Upon Dox administration, a rapid (16–24 h) and dose-dependent (> 0.04 μg ml− 1 Dox) onset of transgene expression was detected in Lv. TII. CDD gene-modified K562 cells as well as in primary human CD34+ hematopoietic cells. Importantly, in both cell models low background transgene expression was observed in the absence of Dox. Functionality of Dox-inducible hCDD expression was demonstrated by> 10-fold increase in cytosine arabinoside (1-β-d-arabinofuranosylcytosine, Ara-C) resistance of Lv. TII. CDD-transduced K562 cells. In addition, Lv. TII. CDD-transduced CD34+-derived myeloid cells were protected from up to 300 n m Ara-C (control affected from 50 n m onwards). These data clearly demonstrate the suitability of our self-inactivating lentiviral vector to induce robust, tightly regulated transgene expression in human hematopoietic cells with minimal background activity and highlight the potential of our construct in myeloprotective gene therapy strategies.
登录
查看更多内容
通过逆转录病毒介导的人胞苷脱氨酶基因转移至小鼠成纤维细胞和造血细胞中，对阿糖胞苷产生抗性。
影响因子：
6.4
作者：
R. Momparler;N. Eliopoulos;V. Bovenzi;S. Létourneau;M. Greenbaum;D. Cournoyer
通讯作者：
D. Cournoyer
影响因子：
11.2
作者：
Milsom MD;Jerabek-Willemsen M;Harris CE;Schambach A;Broun E;Bailey J;Jansen M;Schleimer D;Nattamai K;Wilhelm J;Watson A;Geiger H;Margison GP;Moritz T;Baum C;Thomale J;Williams DA
通讯作者：
Williams DA
影响因子：
12.4
作者：
Kafri, T;van Praag, H;Verma, IM
通讯作者：
Verma, IM
影响因子：
5.4
作者：
Reuss, Simone;Sebestyen, Zsolt;Heinz, Niels;Loew, Rainer;Baum, Christopher;Debets, Reno;Uckert, Wolfgang
通讯作者：
Uckert, Wolfgang
通过新型自我调节慢病毒载体在体内高效 Tet 依赖性表达人因子 IX。
影响因子：
12.4
作者：
E. Vigna;Mario Amendola;F. Benedicenti;A. Simmons;A. Follenzi;L. Naldini
通讯作者：
L. Naldini