Polycistronic RNA polymerase II expression vectors for RNA interference based on BIC/miR-155.
Polycistronic RNA polymerase II expression vectors for RNA interference based on BIC/miR-155.
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DOI：
10.1093/nar/gkl143
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发表时间：
2006-04-13
影响因子：
14.9
通讯作者：
Turner DL
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chung KH;Hart CC;Al-Bassam S;Avery A;Taylor J;Patel PD;Vojtek AB;Turner DL
基于载体的RNA干扰（RNAi）已成为分析基因功能的一种有价值的工具。我们基于非编码RNA BIC开发了新的用于RNAi的RNA聚合酶II表达载体，命名为SIBR载体。BIC包含miR - 155微小RNA（miRNA）前体，并且我们发现小鼠BIC第三个外显子的一个短区域的表达足以在哺乳动物细胞中产生miR - 155。SIBR载体使用一种改良的miR - 155前体茎环以及侧翼的BIC序列来表达与靶RNA互补的合成miRNA。与RNA聚合酶III驱动的短发夹RNA载体一样，SIBR载体能有效地降低靶mRNA和蛋白质的表达。合成的miRNA可从一个内含子中表达，从而允许一个标记物或其他蛋白质与miRNA共表达。此外，从一个双内含子载体中合成miRNA的内含子表达增强了RNAi。一个SIBR载体可从单个转录本中表达两种不同的miRNA，以有效抑制两种不同的靶mRNA。此外，一个合成miRNA的至少八个串联拷贝可在一个多顺反子转录本中表达，以增强对一种靶RNA的抑制。SIBR载体是适用于多种RNAi应用的灵活工具。
Vector-based RNA interference (RNAi) has emerged as a valuable tool for analysis of gene function. We have developed new RNA polymerase II expression vectors for RNAi, designated SIBR vectors, based upon the non-coding RNA BIC. BIC contains the miR-155 microRNA (miRNA) precursor, and we find that expression of a short region of the third exon of mouse BIC is sufficient to produce miR-155 in mammalian cells. The SIBR vectors use a modified miR-155 precursor stem–loop and flanking BIC sequences to express synthetic miRNAs complementary to target RNAs. Like RNA polymerase III driven short hairpin RNA vectors, the SIBR vectors efficiently reduce target mRNA and protein expression. The synthetic miRNAs can be expressed from an intron, allowing coexpression of a marker or other protein with the miRNAs. In addition, intronic expression of a synthetic miRNA from a two intron vector enhances RNAi. A SIBR vector can express two different miRNAs from a single transcript for effective inhibition of two different target mRNAs. Furthermore, at least eight tandem copies of a synthetic miRNA can be expressed in a polycistronic transcript to increase the inhibition of a target RNA. The SIBR vectors are flexible tools for a variety of RNAi applications.
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影响因子：
56.9
作者：
Lagos-Quintana, M;Rauhut, R;Tuschl, T
通讯作者：
Tuschl, T
影响因子：
4.5
作者：
Cai, XZ;Hagedorn, CH;Cullen, BR
通讯作者：
Cullen, BR
影响因子：
64.8
作者：
Lee, Y;Ahn, C;Kim, VN
通讯作者：
Kim, VN
DOI：
10.1073/pnas.0500613102
发表时间：
2005-03-08
影响因子：
11.1
作者：
Eis, PS;Tam, W;Dahlberg, JE
通讯作者：
Dahlberg, JE
影响因子：
11.4
作者：
Lee, Y;Jeon, K;Kim, VN
通讯作者：
Kim, VN