Characterization of acid-base transport mechanisms in the kidney cell line RCCT-28A.
Characterization of acid-base transport mechanisms in the kidney cell line RCCT-28A.
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肾细胞系 RCCT-28A 中酸碱转运机制的表征。
DOI：
10.1038/ki.1993.29
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发表时间：
1993
影响因子：
19.6
通讯作者：
Bello-Reuss,E
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Bello-Reuss,E
肾细胞系 RCCT-28A 中酸碱转运机制的表征。 RCCT-28 A 细胞是兔皮质集合管来源的连续细胞系，已被发现表现出顶端花生凝集素结合、基底带 3 免疫染色和 246 ± 37 Ω cm2 的跨上皮电阻。在报告的研究中，RCCT-28A 细胞的汇合单层在渗透性孔中生长，并在对照溶液或通过降低 PCO2 的碱性溶液中孵育。在不存在药物且存在以下物质的情况下测量顶端溶液中的当量 H+ 通量 (JH+) (nmol·min-1·cm2)：顶端溶液中存在阿米洛利 (A,10-3M)、N-乙基马来酰亚胺 (NEM, 5 mM) 和奥美拉唑 (OM, 100 µM)。在对照溶液中预温育后，JH+ 为 21 ± 2，而 A 没有影响。添加 NEM 将 JH+ 减少至 12 ± 2 (P < 0.005)，添加 OM 将 JH+ 减少至 2 ± 2（与对照相比，P < 0.001）。在低 PCO2 下孵育的单层细胞的基础 JH+ 为 11 ± 5。在这些条件下，添加 NEM 或 OM 不会对 JH+ 产生影响。从顶端溶液中去除 K+ 可使顶端酸化减少 60%。在不同浓度下测试了 H+,K+-ATPase 抑制剂先灵 28080 (SCH)，并证明了抑制效果（分别为 JH+ - 2 ± 1 与 18 ± 1，SCH 与对照）。丙磺舒和巴弗洛霉素-A 也降低了顶端酸化，并且在抑制剂作用下，顶端碱当量挤出是明显的。 JH+通过从基底外侧溶液中去除Cl-而被废除。这些结果与在顶膜和基底外侧膜 Cl-/HCO3 交换器上与 H+、K+-ATP 酶共存的 H+-ATP 酶相一致。建议使用与 H+ 挤出同时操作的根尖基底挤出机构。
Characterization of acid-base transport mechanisms in the kidney cell line RCCT-28A. RCCT-28 A cells, a continuous cell line of rabbit cortical collecting tubule origin, have been found to exhibit apical peanut-lectin binding, basal band-3 immunostaining and a transepithelial electrical resistance of 246 ± 37 Ω cm2. For the studies reported, confluent monolayers of RCCT-28A cells were grown on permeable wells and incubated in a control solution or in alkaline solutions by lowering PCO2. Equivalent H+fluxes (JH+) into the apical solution (nmol · min-1· cm2) were measured in the absence of drugs and in the presence of: amiloride (A,10-3M), N-ethylmaleimide (NEM, 5 mM) and omeprazole (OM, 100 µM) in the apical solution. After preincubation in control solutions JH+ was 21 ± 2 while A had no effect. Addition of NEM diminished JH+ to 12 ± 2 (P < 0.005), and OM diminished JH+ to 2 ± 2 (P < 0.001 vs. control). Monolayers incubated at low PCO2had a basal JH+ of 11 ± 5. No effect on JH+ could be demonstrated under these conditions by addition of NEM or OM. Removal of K+from the apical solution diminished apical acidification by 60%. The inhibitor of H+,K+-ATPase Schering 28080 (SCH) was tested at different concentrations and an inhibitory effect was demonstrated (JH+ - 2 ± 1 vs. 18 ± 1, SCH vs. control, respectively). Probenecid and bafilomycin-A also decreased apical acidification and an apical base-equivalent extrusion was apparent under the inhibitors effect. JH+ was abolished by removal of Cl-from the basolateral solution. These results are compatible with a H+-ATPase coexistent with a H+,K+-ATPase on the apical membrane and a basolateral membrane Cl-/HCO3-exchanger. An apical base extrusion mechanism operating simultaneously with the H+extrusion is suggested.
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