Weak cell cycle dependency but strong distortive effects of transfection with Lipofectamine 2000 in near‐physiologically synchronized cell culture
Weak cell cycle dependency but strong distortive effects of transfection with Lipofectamine 2000 in near‐physiologically synchronized cell culture
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在近乎生理同步的细胞培养中，Lipofectamine 2000 转染的细胞周期依赖性较弱，但扭曲效应较强
DOI：
10.1002/elsc.201600113
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发表时间：
2000
影响因子：
2.7
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
之前，我们报道了一种在接近生理条件下生成和验证多个哺乳动物悬浮细胞系的细胞周期同步培养物的方法。该方法应用于阐明假定的细胞周期和重组蛋白表达在人生产细胞系HEK 293 s中的相互依赖性，使用Lipofectamine 2000和报告质粒pcDNA3.3增强的绿色荧光蛋白，使用PEST序列去稳定化。基于获得的实验数据，应用群体分辨建模方法定量评估细胞周期依赖性表达率的推定变化。我们不能证实其他小组早先发表的结果，基于非生理同步化尝试，报告转染效率强烈依赖于转染时间点的细胞周期阶段。另一方面，它表明，转染和蛋白质表达扭曲的细胞周期的进程。
Previously, we reported a method to generate and validate cell cycle‐synchronized cultures of multiple mammalian suspension cell lines under near‐physiological conditions. This method was applied to elucidate the putative interdependencies of the cell cycle and recombinant protein expression in the human producer cell line HEK293s using Lipofectamine 2000 and the reporter plasmid pcDNA3.3 enhanced green fluorescent protein, destabilized using PEST sequence. A population‐resolved modeling approach was applied to quantitatively assess putative variations of cell cycle dependent expression rates based on the obtained experimental data. We could not confirm results published earlier by other groups, based on nonphysiological synchronization attempts, reporting transfection efficiency being strongly dependent on the cell cycle phase at transfection time point. On the other hand, it is demonstrated that transfection and protein expression distort the progression of the cell cycle.
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