A novel quantification method for retinal pigment epithelium phagocytosis using a very-long-chain polyunsaturated fatty acids-based strategy.
A novel quantification method for retinal pigment epithelium phagocytosis using a very-long-chain polyunsaturated fatty acids-based strategy.
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一种新型的定量方法，用于使用非常长的链多不饱和脂肪酸的策略，用于视网膜色素上皮细胞增多症。
DOI：
10.3389/fnmol.2023.1279457
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发表时间：
2023
影响因子：
4.8
通讯作者：
Skowronska-Krawczyk, Dorota
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Gao, Fangyuan;Tom, Emily;Lieffrig, Stephanie A.;Finnemann, Silvia C.;Skowronska-Krawczyk, Dorota
关键词：
脊椎动物视网膜色素上皮（RPE）位于光感受器附近，并通过受体介导的吞噬作用负责吞噬和降解脱落的光感受器外节片段（POS）。POS的吞噬作用对于维持光感受器功能至关重要，并且是RPE功能的关键指标。流行的评估RPE吞噬作用的方法主要依赖于定量POS蛋白，特别是其最丰富的蛋白质视紫红质，或依赖于大量未指定POS组分的荧光染料缀合。虽然这些方法是实用的和定量的，但它们未能评估POS脂质的命运，POS脂质占POS干重的约50%，并且其加工对于RPE和视网膜的终身功能是必不可少的。我们已经开发了一种新的非常长链多不饱和脂肪酸（VLC-PUFA）为基础的方法来评估原代牛和大鼠RPE和人ARPE-19细胞系的RPE吞噬活性，并使用传统方法验证其结果。这种新方法可用于检测在体外的动态过程中的吞噬作用在不同的POS浓度和孵育时间，并提供了一个强大的，公正的，可重复的测定，将有实用程序的POS脂质加工的研究。
The vertebrate retinal pigment epithelium (RPE) lies adjacent to the photoreceptors and is responsible for the engulfment and degradation of shed photoreceptor outer segment fragments (POS) through receptor-mediated phagocytosis. Phagocytosis of POS is critical for maintaining photoreceptor function and is a key indicator of RPE functionality. Popular established methods to assess RPE phagocytosis rely mainly on quantifying POS proteins, especially their most abundant protein rhodopsin, or on fluorescent dye conjugation of bulk, unspecified POS components. While these approaches are practical and quantitative, they fail to assess the fate of POS lipids, which make up about 50% of POS by dry weight and whose processing is essential for life-long functionality of RPE and retina. We have developed a novel very-long-chain polyunsaturated fatty acids (VLC-PUFA)-based approach for evaluating RPE phagocytic activity by primary bovine and rat RPE and the human ARPE-19 cell line and validated its results using traditional methods. This new approach can be used to detect in vitro the dynamic process of phagocytosis at varying POS concentrations and incubation times and offers a robust, unbiased, and reproducible assay that will have utility in studies of POS lipid processing.
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天然视网膜杆盘膜的纳米级分辨率揭示了脂质成分的差异。
DOI：
10.1083/jcb.202101063
发表时间：
2021-08-02
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Sander CL;Sears AE;Pinto AFM;Choi EH;Kahremany S;Gao F;Salom D;Jin H;Pardon E;Suh S;Dong Z;Steyaert J;Saghatelian A;Skowronska-Krawczyk D;Kiser PD;Palczewski K
通讯作者：
Palczewski K
影响因子：
3.8
作者：
BARCIA, EM;NEWBURGER, J;YOUNG, D
通讯作者：
YOUNG, D
影响因子：
--
作者：
Lewis, Tylor R.;Kundinger, Sean R.;Besharse, Joseph C.
通讯作者：
Besharse, Joseph C.
影响因子：
4.1
作者：
Liu, Aihua;Terry, Ryan;Bernstein, Paul S.
通讯作者：
Bernstein, Paul S.
影响因子：
30.8
作者：
Gal, A;Li, Y;Vollrath, D
通讯作者：
Vollrath, D