Purification and properties of the glycoprotein processing N-acetylglucosaminyltransferase II from plants.
Purification and properties of the glycoprotein processing N-acetylglucosaminyltransferase II from plants.
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植物中糖蛋白加工 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶 II 的纯化和特性。
DOI：
10.1021/bi00391a043
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发表时间：
1987
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Elbein,AD
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Szumilo,T;Kaushal,GP;Elbein,AD
Department of Biochemistry，University of Texas Health Science Center，圣安东尼奥，德克萨斯州78284接收于1987年1月30日;修订的Mandarin pt接收于1987年4月20日摘要：在绿豆幼苗中证明了能够将GlcNAc残基添加到GlcNAc Man 3GlcNAc的N-乙酰葡糖胺转移酶（GlcNAc-转移酶）的存在。用（二乙基氨基乙基）纤维素和磷酸纤维素层析及伴刀豆球蛋白A-Sepharose层析，将该酶纯化约3400倍。通过跟踪[3 H]甘露糖标记的GlcNAc 01，2 Manal，3（Manal，6）Man 01，4GlcNAc在Bio-Gel P-4上的迁移变化，或通过将[3 H] GlcNAc从UDP-[3 H] GlcNAc掺入中性产物（GlcNAc）2 Man 3GlcNAc中，测定转移酶。因此，纯化的酶催化将GlcNAc添加到以1，6键连接到O-连接的甘露糖的甘露糖上。GlcNAc 01，2 Manal，3（Manal，6）Man 01，4GlcNAc是极好的受体，而Manal，6（Manal，3）Man 01，4GlcNAc、Manal，6（Manal，3）Manal、6-（Manal，3）Man 01，4GlcNAc和Mana 1，6（Manal，3）Man 1，6 [GlcNAcMana 1，3] Man 01，4GlcNAc不是受体。甲基化分析和酶促双链反应表明，（GlcNAc）2 Man 3GlcNAc上的两个末端GlcNAc残基以01，2键连接到甘露糖上。GlcNAc转移酶对二价阳离子几乎有绝对的需求，Mn ~（2+）在2-3 mM时最好，Mn ~（2+）不能被Mg ~（2+）或Ca ~（2+）所取代，但Cd ~（2+）有一定的活性。去污剂对酶有明显的刺激作用，在0.15%Triton X-100时酶活力最高。发现UDP-GlcNAc的Km为18 µ，GlcNAcMan 3GlcNAc的Km约为16 µ。
Department of Biochemistry, University of Texas Health Science Center, San Antonio, Texas 78284 Received January 30, 1987; Revised Manuscript Received April 20, 1987 abstract: The presence of an TV-acetylglucosaminyltransferase (GlcNAc-transferase) capable of adding a GlcNAc residue to GlcNAcMan3GlcNAc was demonstrated in mung bean seedlings. This enzyme was purified about 3400-foldby using (diethylaminoethyl) cellulose and phosphocellulose chromatographies and chromatography on Concanavalin A-Sepharose. The transferase was assayed by following the change in the migration of the [3H] mannose-labeled GlcNAc01, 2Manal, 3 (Manal, 6) Man01, 4GlcNAc on Bio-Gel P-4, or by incorporation of [3H] GlcNAc from UDP-[3H] GlcNAc into a neutral product,(GlcNAc) 2Man3GlcNAc. Thus, the purified enzyme catalyzed the addition of a GlcNAc to that mannose linked in a 1, 6 linkage to the 0-linked mannose. GlcNAc01, 2Manal, 3 (Manal, 6) Man01, 4GlcNAc was an excellent acceptor while Mana1, 6 (Mana1, 3) Man01, 4GlcNAc, Manal, 6 (Manal, 3) Manal, 6-(Manal, 3) Man01, 4GlcNAc, and Mana 1, 6 (Manal, 3) Mana 1, 6 [GlcNAcMana 1, 3] Man01, 4GlcNAc were not acceptors. Methylation analysis and enzymatic digestions showed that both terminal GlcNAc residues on (GlcNAc) 2Man3GlcNAc were attached to the mannoses in 01, 2 linkages. The GlcNAc transferase had an almost absolute requirementfor divalent cation, with Mn2+ being best at 2-3 mM. Mn2+ could notbe replaced by Mg2+ or Ca2+, but Cd2+ showed some activity. Theenzyme was also markedly stimulated by the presence of detergent and showed optimumactivity at 0.15% Triton X-100. The Km for UDP-GlcNAc was found to be 18 µ and that for GlcNAcMan3GlcNAc about 16 µ.
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