Mass spectrometry of intact membrane protein complexes.
Mass spectrometry of intact membrane protein complexes.
复制标题
完整膜蛋白复合物的质谱法。
DOI：
10.1038/nprot.2013.024
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发表时间：
2013-04
期刊：
影响因子：
14.8
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中科院分区：
文献类型：
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作者：
完整的可溶性蛋白质复合物的质谱分析已经成为研究蛋白质组装体的化学计量、结构-功能和动力学的一种强有力的技术。最近的发展已经将这种技术扩展到膜蛋白复合物的研究，其中它已经揭示了亚基化学计量和特定的磷脂相互作用。在这里，我们描述了一个协议的膜蛋白复合物的质谱。该方案从膜蛋白复合物的制备开始，不仅能够直接评估目标复合物的化学计量、脱脂和质量，而且还能够评估纯化策略。一个兼容的非离子洗涤剂的详细清单包括在内，沿着一个协议筛选洗涤剂，以找到一个最佳的质谱，生物化学和结构研究。该协议还涵盖了蛋白质-脂质结合研究的脂质制备，并包括从金涂层纳米流毛细管引入复合物后Q-ToF质谱仪的详细设置。
Mass spectrometry of intact soluble protein complexes has emerged as a powerful technique to study the stoichiometry, structure-function and dynamics of protein assemblies. Recent developments have extended this technique to the study of membrane protein complexes where it has already revealed subunit stoichiometries and specific phospholipid interactions. Here, we describe a protocol for mass spectrometry of membrane protein complexes. The protocol begins with preparation of the membrane protein complex enabling not only the direct assessment of stoichiometry, delipidation, and quality of the target complex, but also evaluation of the purification strategy. A detailed list of compatible non-ionic detergents is included, along with a protocol for screening detergents to find an optimal one for mass spectrometry, biochemical and structural studies. This protocol also covers the preparation of lipids for protein-lipid binding studies and includes detailed settings for a Q-ToF mass spectrometer after introduction of complexes from gold-coated nanoflow capillaries.
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影响因子：
5.7
作者：
Sonoda, Yo;Newstead, Simon;Hu, Nien-Jen;Alguel, Yilmaz;Nji, Emmanuel;Beis, Konstantinos;Yashiro, Shoko;Lee, Chiara;Leung, James;Cameron, Alexander D.;Byrne, Bernadette;Iwata, So;Drew, David
通讯作者：
Drew, David
影响因子：
14.8
作者：
Drew, David;Newstead, Simon;Iwata, So
通讯作者：
Iwata, So
影响因子：
14.8
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Hernandez, Helena;Robinson, Carol V.
通讯作者：
Robinson, Carol V.
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Pédelacq, JD;Cabantous, S;Waldo, GS
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通讯作者：
Dutzler, Raimund