Reconstitution of Multi-Protein Complexes through Ribozyme-Assisted Polycistronic Co-Expression.
Reconstitution of Multi-Protein Complexes through Ribozyme-Assisted Polycistronic Co-Expression.
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DOI：
10.1021/acssynbio.2c00416
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发表时间：
2023-01-20
影响因子：
4.7
通讯作者：
Lin, Jinzhong
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Liu, Yan;Wu, Zihan;Wu, Damu;Gao, Ning;Lin, Jinzhong
在活细胞中，蛋白质通常通过与其他蛋白质相互作用形成蛋白质复合物来发挥其功能。获得具有正确折叠和化学计量的蛋白质复合物的均匀样品对于其生化和生物物理表征以及功能研究至关重要。在这里，我们开发了一种核酶辅助的多顺反子共表达系统（pRAP），用于异种协同生产和多亚基复合物的体内组装。在pRAP系统中，多顺反子mRNA转录物在体内共转录转化为单个单顺反子。每个顺反子都能以相当的效率启动翻译，导致所有亚基的平衡生产，从而允许忠实的蛋白质复合物组装。通过pRAP多顺反子共表达，我们成功地重组了参与哺乳动物翻译起始的大型功能多亚基复合物。我们的发明为研究生物过程的分子机制提供了有价值的工具。
In living cells, proteins often exert their functions by interacting with other proteins forming protein complexes. Obtaining homogeneous samples of protein complexes with correct fold and stoichiometry is critical for its biochemical and biophysical characterization as well as functional investigation. Here, we developed a Ribozyme-Assisted Polycistronic co-expression system (pRAP) for heterologous co-production and in vivo assembly of multi-subunit complexes. In the pRAP system, a polycistronic mRNA transcript is co-transcriptionally converted into individual mono-cistrons in vivo. Each cistron can initiate translation with comparable efficiency, resulting in balanced production for all subunits, thus permitting faithful protein complex assembly. With pRAP polycistronic co-expression, we have successfully reconstituted large functional multi-subunit complexes involved in mammalian translation initiation. Our invention provides a valuable tool for studying the molecular mechanisms of biological processes.
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影响因子：
5.6
作者：
Andaya A;Villa N;Jia W;Fraser CS;Leary JA
通讯作者：
Leary JA
DOI：
10.1073/pnas.94.6.2278
发表时间：
1997-03-18
影响因子：
11.1
作者：
Li, C;Schwabe, JWR;Evans, RM
通讯作者：
Evans, RM
影响因子：
64.5
作者：
Meyer KD;Patil DP;Zhou J;Zinoviev A;Skabkin MA;Elemento O;Pestova TV;Qian SB;Jaffrey SR
通讯作者：
Jaffrey SR
影响因子：
4.7
作者：
Patel YD;Brown AJ;Zhu J;Rosignoli G;Gibson SJ;Hatton D;James DC
通讯作者：
James DC
影响因子：
3.7
作者：
Koh, Esther Y. C.;Ho, Steven C. L.;Yang, Yuansheng
通讯作者：
Yang, Yuansheng