Suppression of amber codons in Caulobacter crescentus by the orthogonal Escherichia coli histidyl-tRNA synthetase/tRNAHis pair.
Suppression of amber codons in Caulobacter crescentus by the orthogonal Escherichia coli histidyl-tRNA synthetase/tRNAHis pair.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0083630
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发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Söll D
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ko JH;Llopis PM;Heinritz J;Jacobs-Wagner C;Söll D
虽然在许多细菌、古生菌和真核生物中，抑制因子trna对终止密码子的翻译读通是很常见的，但在α-变形杆菌新月形茎杆菌中尚未观察到这种现象。基于先前报道的新月梭菌与大肠杆菌tRNAHis具有不同的同源元件，我们构建了新月梭菌UAG抑制tRNA——大肠杆菌tRNAHis CUA。通过检测三个含有UAG密码子的报告基因的表达（编码β-内酰胺酶，荧光mCherry蛋白，或C. crescentus xylonate脱水酶），我们证明大肠杆菌组氨酸- trna合成酶/tRNAHis CUA对能够在体内抑制C. crescentus UAG。大肠杆菌组氨酸- trna合成酶（HisRS）或tRNAHis CUA均未达到抑制效果；这表明大肠杆菌HisRS/tRNAHis CUA对在新月形菌中是正交的。这些结果表明，通过正交的氨基酰基-tRNA合成酶/抑制tRNA对可以实现月牙草UAG的抑制。
While translational read-through of stop codons by suppressor tRNAs is common in many bacteria, archaea and eukaryotes, this phenomenon has not yet been observed in the α-proteobacterium Caulobacter crescentus. Based on a previous report that C. crescentus and Escherichia coli tRNAHis have distinctive identity elements, we constructed E. coli tRNAHis CUA, a UAG suppressor tRNA for C. crescentus. By examining the expression of three UAG codon- containing reporter genes (encoding a β-lactamase, the fluorescent mCherry protein, or the C. crescentus xylonate dehydratase), we demonstrated that the E. coli histidyl-tRNA synthetase/tRNAHis CUA pair enables in vivo UAG suppression in C. crescentus. E. coli histidyl-tRNA synthetase (HisRS) or tRNAHis CUA alone did not achieve suppression; this indicates that the E. coli HisRS/tRNAHis CUA pair is orthogonal in C. crescentus. These results illustrate that UAG suppression can be achieved in C. crescentus with an orthogonal aminoacyl-tRNA synthetase/suppressor tRNA pair.
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