Folding domains as functional tools in allosteric systems: a heme-dependent domain in hemoglobin beta subunits.
Folding domains as functional tools in allosteric systems: a heme-dependent domain in hemoglobin beta subunits.
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折叠结构域作为变构系统中的功能工具：血红蛋白β亚基中的血红素依赖性结构域。
DOI：
10.1021/bi00267a024
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发表时间：
1982
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Bucci,E
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Franchi,D;Fronticelli,C;Bucci,E
材料和方法血红蛋白0亚基和多肽0（1-55）、0-（56-146）和apo-0（1 -146）如前所述制备（Fronticelli-Bucci & Bucci，1975; Fronticelli & Gold，1976）。在这些说明中，093和0112处的所有可用半胱氨酸都是羧酰胺甲基化的，以防止形成分子内和分子间二硫键。这些多肽的聚集状态示于表I中，其中数据是从沉降速度和平衡的实验中收集的。一些数据已经从该实验室发表（Fronticelli & Bucci，1975; Fronticelli & Gold，1976; Otón等人，1981年）。不含血红素的多肽是自缔合系统，其平均分子量是浓度依赖性的。表1中的数据表明，在旋光光谱实验中使用的浓度为0.04-0.09 mg/mL时，不含血红素的肽基本上是单体。对于apo-0（l-146），0.07 mg/mL时的重均分子量介于单体和二聚体之间。应该记住，重均分子量偏向于较大的分子种类。表I还表明，羧酰胺甲基化的0亚基在所有条件下都是单体。通过使用在540 nm处的e= 14000 M-1 cm-1，对一氧化碳0亚基用荧光光度法测量蛋白质浓度。对于不含血红素的肽，使用定量氨基酸分析。或者，对于apo-0（1 - 146），通过在0.1M NaOH中，在280 nm下使用ε = 1.0 mL mg-1 cm-1进行分光光度测量。0（56-145），包括血红蛋白0亚基的指定残基的多肽; 0亚基，血红蛋白0亚基; Gdn-HCl，盐酸胍。
Materials and MethodsHemoglobin 0 subunits and the polypeptides 0 (1-55), 0-(56-146), and apo-0 (l-146) were prepared as previously described (Fronticelli-Bucci & Bucci, 1975; Fronticelli & Gold, 1976). In these preparationsall of the available cysteines at 093 and 0112 are carboxamidomethylated, so to prevent formation of intra-and intermolecular disulfide bonds. The state of aggregation of these polypeptides is shown in Table I where data are collected from experiments of sedi-mentation velocity and equilibrium. Some of the data have been already published from this laboratory (Fronticelli-Bucci & Bucci, 1975; Fronticelli & Gold, 1976; Otón et al., 1981). The heme-free polypeptides are self-associating systems whose average molecular weight is concentration dependent. The data presented in Table I indicate that at the concen-trations used in spectropolarimetric experiments, 0.04-0.09 mg/mL, the heme-free peptides were essentially monomeric. For apo-0 (l-146), the weight-average molecular weight at 0.07 mg/mL was between that of a monomer and that of a dimer. It should be remembered that weight-average molecular weights are biased in favor of the larger molecular species. Table I also shows that carboxamidomethylated 0 subunits were monomeric under all conditions. Protein concentration was measured spectrophotometrically for carbon monoxy 0 subunits by using e= 14000 M" 1 cm" 1 at 540 nm. For the heme-free peptides quantitative amino acid analysis was used. Alternatively, for apo-0 (l-146), spectro-photometric measurements were performed by using£= 1.0 mL mg" 1 cm" 1 at 280 nm, in 0.1 M NaOH.1 Abbreviations: apo-0 (l-146), heme-free derivative of the ß subunits of hemoglobin; 0 (1-55), polypeptide including the first 55 residues of hemoglobin; 0 (56-145), polypeptide including the indicated residues of the 0 subunits of hemoglobin; 0 subunits, hemoglobin 0 subunits; Gdn-HCl, guanidine hydrochloride.
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