Specific high-affinity binding of fatty acids to epidermal cytosolic proteins.
Specific high-affinity binding of fatty acids to epidermal cytosolic proteins.
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脂肪酸与表皮胞质蛋白的特异性高亲和力结合。
DOI：
10.1111/1523-1747.ep12480586
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发表时间：
1991
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Mukhtar,H
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Raza,H;Chung,WL;Mukhtar,H
将来自大鼠、小鼠和人皮肤或大鼠表皮的细胞溶胶与[3 H]花生四烯酸、[14 C]视黄酸、[14 C]油酸、[3 H]白三烯A4、[3 H]前列腺素E2（PGE 2）或[3 H] 15-羟基二十碳四烯酸（15-HETE）孵育，并在4 ℃下使用Lipidex-1000分离蛋白质结合的配体，以评估结合特异性。油酸和花生四烯酸与大鼠表皮细胞液的结合是快速的、可饱和的和可逆的。油酸的结合与同时加入的其他配体竞争，并发现其顺序如下：花生四烯酸>油酸>亚油酸>月桂酸>白三烯A4> 15-HETE β PGE 1> PGE 2 = PGF 2 = PGD 2。与花生四烯酸，油酸，和视黄酸的结合的Scatchard分析显示高亲和力的结合位点的解离常数在nM范围内。油酸结合的表皮胞质蛋白的SDS-PAGE分析显示在14.5 kDa区域的最大结合。表皮细胞质中脂肪酸结合蛋白的存在及其与脂肪酸和视黄酸的结合可能在脂肪酸和类维生素A穿过皮肤的运输和代谢中具有重要意义。
Cytosol from rat, mouse, and human skin or rat epidermis was incubated with [3H]arachidonic acid, [14C]retinoic acid, [14C]oleic acid, [3H]leukotriene A4, [3H]prostaglandin E2(PGE2) or [3H] 15-hydroxyeicosatetraenoic acid (15-HETE), and protein-bound ligands were separated using Lipidex-1000 at 4 °C to assess the binding specificity. The binding of oleic acid and arachidonic acid with rat epidermal cytosol was rapid, saturable, and reversible. Binding of oleic acid was competed out with the simultaneous addition of other ligands and found to be in the following order: arachidonic acid > oleic acid > linoleic acid > lauric acid > leukotriene A4> 15-HETE ≈ PGE1> PGE2= PGF2= PGD2. Scatchard analysis of the binding with arachidonic acid, oleic acid, and retinoic acid revealed high-affinity binding sites with the dissociation constant in the nM range. SDS-PAGE analysis of the oleic acid-bound epidermal cytosolic protein(s) revealed maximum binding at the 14.5 kDa region. The presence of the fatty acid-binding protein in epidermal cytosol and its binding to fatty acids and retinoic acid may be of significance both in the trafficking and the metabolism of fatty acids and retinoids across the skin.
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