Imaging beads-retained prey assay for rapid and quantitative protein-protein interaction.
Imaging beads-retained prey assay for rapid and quantitative protein-protein interaction.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0059727
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发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Lu L
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zhou Y;Hong W;Lu L
常规的基于蛋白质印迹的下拉方法涉及冗长和费力的工作，并且结果通常不是定量的。在这里，我们报告的成像珠保留猎物（IBRP）测定，是快速和定量研究蛋白质-蛋白质相互作用。在该测定中，诱饵被固定在珠子上，猎物与荧光蛋白融合。该测定利用了猎物的荧光，并在显微镜下直接定量与固定化诱饵结合的猎物的量。我们使用先前充分研究的相互作用验证了该测定，并发现保留在珠子上的猎物的量与诱饵和猎物的输入都具有相对线性关系。IBRP为研究蛋白质相互作用提供了一种通用、快速、定量和经济的方法，有望发展成为一种中、高通量的方法。随着荧光标记的全基因组ORF在多种生物中的应用，我们预测IBRP检测将具有广泛的应用前景。
Conventional Western blot based pull-down methods involve lengthy and laborious work and the results are generally not quantitative. Here, we report the imaging beads-retained prey (IBRP) assay that is rapid and quantitative in studying protein-protein interactions. In this assay, the bait is immobilized onto beads and the prey is fused with a fluorescence protein. The assay takes advantage of the fluorescence of prey and directly quantifies the amount of prey binding to the immobilized bait under a microscope. We validated the assay using previously well studied interactions and found that the amount of prey retained on beads could have a relative linear relationship to both the inputs of bait and prey. IBRP assay provides a universal, fast, quantitative and economical method to study protein interactions and it could be developed to a medium- or high-throughput compatible method. With the availability of fluorescence tagged whole genome ORFs in several organisms, we predict IBRP assay should have wide applications.
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