Development and use of a selectable, broad-host-range reporter transposon for identifying environmentally regulated promoters in bacteria.
Development and use of a selectable, broad-host-range reporter transposon for identifying environmentally regulated promoters in bacteria.
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开发和使用可选择的、广泛宿主范围的报告转座子来识别细菌中环境调节的启动子。
DOI：
10.1111/j.1574-6968.2008.01430.x
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发表时间：
2009
影响因子：
2.1
通讯作者：
Holmes,RandallK
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Spinler,JenniferK;Zajdowicz,SherylLW;Haller,JonC;Oram,DianaMarra;Gill,RonaldE;Holmes,RandallK
本报告描述了TnKnXSp，一个可选择的广泛的主机范围的报告转座子与promoterlessaphA基因的开发和使用。TnKnXSpin插入卡那霉素敏感细菌的染色体中，只有当aphA从插入位点附近的活性启动子转录时，才会产生卡那霉素抗性。我们设计了TnKnXSpa作为一种工具，用于识别细菌中环境调节的启动子，并开发了用于初始表征任何TnKnXSpintegrant的通用方法。为了识别. jpeg“y白喉棒杆菌中推定的铁调节启动子，我们构建了TnKnXSpintegants，并识别. jpeg“y一个在低铁条件下表达卡那霉素抗性但在高铁条件下不表达卡那霉素抗性的亚组。我们表征了具有这种表型的代表性整合体，在每个整合体中定位了TnKnXSpinsertion，并证明了在高铁与低铁生长条件下转录ofaphA被抑制。我们还证明了TnKnXSp可以用于除C.白喉，包括大肠杆菌和枯草芽孢杆菌。我们的研究结果验证了TnKnXSpas是一个有用的工具，用于识别细菌中环境调节的启动子。
This report describes the development and use of TnKnXSp, a selectable broad-host-range reporter transposon with a promoterlessaphA gene. Insertion of TnKnXSpinto the chromosome of a kanamycin-susceptible bacterium confers resistance to kanamycin only ifaphA is transcribed from an active promoter adjacent to the insertion site. We designed TnKnXSpas a tool for iden.jpeg"ying environmentally regulated promoters in bacteria and developed general methods for initial characterization of any TnKnXSpintegrant. To iden.jpeg"y putative iron-regulated promoters inCorynebacterium diphtheriae, we constructed TnKnXSpintegrants and iden.jpeg"ied a subgroup that expressed kanamycin resistance under low-iron, but not high-iron, conditions. We characterized representative integrants with this phenotype, located the TnKnXSpinsertion in each, and demonstrated that transcription ofaphA was repressed under high-iron vs. low-iron growth conditions. We also demonstrated that TnKnXSpcan be used in bacteria other thanC. diphtheriae, includingEscherichia coliandBacillus subtilis. Our findings validate TnKnXSpas a useful tool for iden.jpeg"ying environmentally regulated promoters in bacteria.
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铁依赖性调节器
DOI：
10.1002/0470028637.met161
发表时间：
1999
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作者：
M. Feese;E. Pohl;R. Holmes;W. Hol
通讯作者：
W. Hol
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