Labeling of multiple HIV-1 proteins with the biarsenical-tetracysteine system.
Labeling of multiple HIV-1 proteins with the biarsenical-tetracysteine system.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0017016
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发表时间：
2011-02-11
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Mak J
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Pereira CF;Ellenberg PC;Jones KL;Fernandez TL;Smyth RP;Hawkes DJ;Hijnen M;Vivet-Boudou V;Marquet R;Johnson I;Mak J
由于其小尺寸和多功能性，双砷-四胱氨酸系统是一种有吸引力的方式来标记病毒蛋白的活细胞成像。本研究描述了人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）结构蛋白（基质、衣壳和核衣壳）、酶（蛋白酶、逆转录酶、RNAse H和整合酶）和包膜糖蛋白120在全长病毒背景下的四胱氨酸标签的遗传标记。我们测量了这些修饰对自然病毒感染的影响，最重要的是，提出了第一个含有荧光标记核衣壳蛋白的感染性HIV-1构建体。此外，由于通常与标记四胱氨酸标记蛋白相关的高背景水平，我们还优化了一种代谢标记系统，该系统产生含有天然包膜糖蛋白和特异性标记的四胱氨酸标记蛋白的感染性病毒，这些蛋白在病毒感染t淋巴细胞后很容易被检测到。这种方法可以适用于其他病毒系统，用于在感染过程中可视化病毒与宿主细胞之间的相互作用。
Due to its small size and versatility, the biarsenical-tetracysteine system is an attractive way to label viral proteins for live cell imaging. This study describes the genetic labeling of the human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) structural proteins (matrix, capsid and nucleocapsid), enzymes (protease, reverse transcriptase, RNAse H and integrase) and envelope glycoprotein 120 with a tetracysteine tag in the context of a full-length virus. We measure the impact of these modifications on the natural virus infection and, most importantly, present the first infectious HIV-1 construct containing a fluorescently-labeled nucleocapsid protein. Furthermore, due to the high background levels normally associated with the labeling of tetracysteine-tagged proteins we have also optimized a metabolic labeling system that produces infectious virus containing the natural envelope glycoproteins and specifically labeled tetracysteine-tagged proteins that can easily be detected after virus infection of T-lymphocytes. This approach can be adapted to other viral systems for the visualization of the interplay between virus and host cell during infection.
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