Refinement of a radioreceptor binding assay for nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate.
Refinement of a radioreceptor binding assay for nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate.
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DOI：
10.1016/j.ab.2007.08.030
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发表时间：
2007-12-01
影响因子：
2.9
通讯作者：
Churchill GC
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Lewis AM;Masgrau R;Vasudevan SR;Yamasaki M;O'Neill JS;Garnham C;James K;Macdonald A;Ziegler M;Galione A;Churchill GC
测量细胞中烟酸腺嘌呤二核苷酸磷酸（NAADP）水平的变化一直是并仍然是研究NAADP作为Ca 2+释放第二信使的功能的关键。在这里，我们提供了如何从细胞中分离的高氯酸提取NAADP，然后使用放射受体测定NAADP的细节。我们证明，NAADP既不产生，也不打破了在样品处理条件下，放射性受体测定是高度选择性的细胞提取物条件下检测NAADP。此外，还进行了一些改进，如放射性的固态检测，以提高程序的安全性。最后，我们开发了一种新的方法来阻止内源性代谢的NAADP螯合钙与双-（邻氨基苯氧基）乙烷-N，N，N′，N′-四乙酸（BAPTA），从而减少捕捉的难度在NAADP水平的短暂上升。总之，我们已经完善和改进了一种测量NAADP水平的方法，并以一种广泛的实验室可以使用的方式将其呈现出来。预计这将加强NAADP领域的研究。
The measurement of changes in nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate (NAADP) levels in cells has been, and remains, key to the investigation of the functions of NAADP as a Ca2+-releasing second messenger. Here we provide details of how to isolate NAADP from cells by extraction with perchloric acid and then measure the NAADP using a radioreceptor assay. We demonstrate that NAADP is neither generated nor broken down during sample processing conditions and that radioreceptor assay is highly selective for the detection of NAADP under cell extract conditions. Furthermore, a number of improvements, such as solid-state detection of the radioactivity, are incorporated to enhance the safety of the procedure. Finally, we have developed a new method to prevent the endogenous metabolism of NAADP by chelating Ca2+ with bis-(o-aminophenoxy)ethane-N,N,N′,N′-tetraacetic acid (BAPTA), thereby reducing the difficulty of catching a small transient rise in NAADP levels. In summary, we have refined and improved a method for measuring NAADP levels and presented it in a manner accessible to a wide range of laboratories. It is expected that this will enhance research in the NAADP field.
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影响因子：
4.1
作者：
Churamani, D;Carrey, EA;Patel, S
通讯作者：
Patel, S
DOI：
10.1006/bbrc.2000.3444
发表时间：
2000-09-16
影响因子：
3.1
作者：
Billington, RA;Genazzani, AA
通讯作者：
Genazzani, AA
影响因子：
4.8
作者：
Kinnear, NP;Boittin, FX;Evans, AM
通讯作者：
Evans, AM
NADP 代谢物烟酸腺嘌呤二核苷酸磷酸引起的高等植物内质网钙释放
DOI：
10.1073/pnas.140217897
发表时间：
2000-07-18
影响因子：
11.1
作者：
Navazio, L;Bewell, MA;Sanders, D
通讯作者：
Sanders, D
影响因子：
4.8
作者：
Gasser, Andreas;Bruhn, Soren;Guse, Andreas H.
通讯作者：
Guse, Andreas H.