High-efficiency targeted editing of large viral genomes by RNA-guided nucleases.
High-efficiency targeted editing of large viral genomes by RNA-guided nucleases.
复制标题
RNA 引导核酸酶对大型病毒基因组进行高效靶向编辑
DOI：
10.1371/journal.ppat.1004090
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发表时间：
2014-05
期刊：
影响因子：
6.7
通讯作者：
Li Q
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Bi Y;Sun L;Gao D;Ding C;Li Z;Li Y;Cun W;Li Q
选择减毒疫苗株以及构建基因治疗载体需要一种简便高效的大型病毒基因组精确编辑方法。在病毒复制过程中，II型原核CRISPR - Cas（成簇规律间隔短回文重复序列（CRISPR）相关（Cas））RNA引导的核酸酶系统可被引入宿主细胞。CRISPR - Cas9系统能强烈诱导DNA病毒基因组发生靶向双链断裂，在此过程中，可利用非同源末端连接（NHEJ）和同源定向修复（HDR）途径高频引入位点特异性插入缺失或插入异源基因。此外，CRISPR - Cas9可特异性抑制原始病毒的复制，从而显著提高子代病毒中重组病毒的丰度。因此，仅需一轮筛选即可获得纯化的重组病毒。在本研究中，我们以重组腺病毒和I型单纯疱疹病毒为例，证明CRISPR - Cas9系统是编辑大型DNA病毒基因组的一种有价值的工具。
成簇规律间隔短回文重复序列（CRISPR）相关（Cas）系统是作为细菌获得性免疫系统的一个组成部分被发现的，它可切割外源DNA。该系统现在被用于包括细菌、酵母、植物和动物在内的多种生物的位点特异性基因组编辑。然而，这种方法在非细胞生物（如非整合病毒）中的应用尚未见报道。由于利用现有方法构建具有大型基因组的突变或重组DNA病毒需要多个步骤，我们使用CRISPR - Cas9系统将位点特异性插入缺失引入腺病毒载体和野生型单纯疱疹病毒，并插入一个外源基因。CRISPR - Cas9编辑的高效率使得重组子代病毒的构建和纯化变得简单。我们认为，这项新技术对于选择减毒疫苗株和抗病毒药物、构建基因治疗载体以及建立有效的病毒生物学研究方法具有广泛的实际意义。
A facile and efficient method for the precise editing of large viral genomes is required for the selection of attenuated vaccine strains and the construction of gene therapy vectors. The type II prokaryotic CRISPR-Cas (clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)-associated (Cas)) RNA-guided nuclease system can be introduced into host cells during viral replication. The CRISPR-Cas9 system robustly stimulates targeted double-stranded breaks in the genomes of DNA viruses, where the non-homologous end joining (NHEJ) and homology-directed repair (HDR) pathways can be exploited to introduce site-specific indels or insert heterologous genes with high frequency. Furthermore, CRISPR-Cas9 can specifically inhibit the replication of the original virus, thereby significantly increasing the abundance of the recombinant virus among progeny virus. As a result, purified recombinant virus can be obtained with only a single round of selection. In this study, we used recombinant adenovirus and type I herpes simplex virus as examples to demonstrate that the CRISPR-Cas9 system is a valuable tool for editing the genomes of large DNA viruses.
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影响因子：
56.9
作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle
影响因子：
46.9
作者：
Cho, Seung Woo;Kim, Sojung;Kim, Jin-Soo
通讯作者：
Kim, Jin-Soo
DOI：
10.1073/pnas.1308335110
发表时间：
2013-08-20
影响因子：
11.1
作者：
Jao, Li-En;Wente, Susan R.;Chen, Wenbiao
通讯作者：
Chen, Wenbiao
影响因子：
56.9
作者：
Philippe, Nadege;Legendre, Matthieu;Abergel, Chantal
通讯作者：
Abergel, Chantal
影响因子：
46.9
作者：
通讯作者：
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