Characterization and engineering of broadly reactive monoclonal antibody against hepatitis B virus X protein that blocks its interaction with DDB1
Characterization and engineering of broadly reactive monoclonal antibody against hepatitis B virus X protein that blocks its interaction with DDB1
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针对乙型肝炎病毒 X 蛋白的广泛反应性单克隆抗体的表征和工程设计，可阻断其与 DDB1 的相互作用
DOI：
10.1038/s41598-019-56819-8
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发表时间：
2019-12
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Liu J.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Tao S;Pan S;Gu C;Wei L;Kang N;Xie Y;Liu J.
乙型肝炎病毒 (HBV) X 蛋白 (HBx) 在病毒生命周期和 HBV 相关致癌作用中发挥着多种作用。它与 DNA 损伤结合蛋白 1 (DDB1) 的相互作用被证明对于产生有利于最佳病毒转录和复制的细胞条件至关重要。此前，我们描述了一种针对 HBx 的小鼠单克隆抗体（抗 HBx 2A7），可识别由 8 种已知 HBV 基因型中的 7 种代表性菌株编码的 HBx。在这项工作中，我们进一步表征了 2A7，以探索其在 HBx 靶向应用中的潜在用途。我们证明 2A7 识别映射到 HBx 上 L89PKVLHKR96 的线性表位，该表位在不同基因型之间高度保守，并且与 DDB1 相互作用片段恰好重叠。 HBx-DDB1 结合可在体外被 2A7 抑制，表明治疗潜力。然后获得2A7的核酸和氨基酸序列，这允许构建重组抗体和单链可变片段(scFv)。 2A7 衍生的重组抗体和 scFv 概括了 2A7 的 HBx 结合能力和表位特异性。我们还报告了使用细胞穿透肽跨细胞膜递送 2A7 抗体以靶向细胞内 HBx 的初步结果。这里表征的抗 HBx 2A7 和 2A7 衍生的 scFv 可能会产生针对 HBV 和 HBx 相关病理的新型 HBx 靶向诊断和治疗方法。
Hepatitis B virus (HBV) X protein (HBx) plays diverse roles in both viral life cycle and HBV-related carcinogenesis. Its interaction with DNA damage-binding protein 1 (DDB1) was shown to be essential for engendering cellular conditions favorable for optimal viral transcription and replication. Previously, we described a mouse monoclonal antibody against HBx (anti-HBx 2A7) recognizing HBx encoded by representative strains from 7 of 8 known HBV genotypes. In this work, we further characterized 2A7 in order to explore its potential usefulness in HBx-targeting applications. We demonstrated that 2A7 recognizes a linear epitope mapped to L89PKVLHKR96on HBx, a segment that is highly conserved across genotypes and coincidentally overlaps with the DDB1-interacting segment. HBx-DDB1 binding could be inhibited by 2A7in vitro, suggesting therapeutic potential. Nucleic acid and amino acid sequences of 2A7 were then obtained, which allowed construction of recombinant antibody and single chain variable fragments (scFv). 2A7-derived recombinant antibody and scFv recapitulate 2A7’s HBx-binding capacity and epitope specificity. We also reported preliminary results using cell-penetrating peptide for delivering 2A7 antibody across cell membrane to target intracellular HBx. Anti-HBx 2A7 and 2A7-derived scFv characterized here may give rise to novel HBx-targeting diagnostics and therapeutics for HBV- and HBx-related pathologies.
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