RNA-guided editing of bacterial genomes using CRISPR-Cas systems.
RNA-guided editing of bacterial genomes using CRISPR-Cas systems.
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DOI：
10.1038/nbt.2508
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发表时间：
2013-03
影响因子：
46.9
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
核酸酶对特定DNA序列的靶向有助于基因组编辑。最近的工作表明，CRISPR相关（CAS）核酸酶Cas9可以通过修改Short7 CRISPR RNA（CRRNA）指南来靶向体外序列。在这里，我们使用这种CRISPR-CAS系统在肺炎链球菌和大肠杆菌中引入无标记突变。该方法涉及通过使用与靶染色体基因座的crRNA互补并引入带有所需突变的模板DNA和改变CRRNA识别位点的模板DNA来重新编程的Cas9，以与目标基因座重新组合。我们详尽地分析了CAS9目标需求，以定义可目标序列的范围，并显示不符合这些要求的编辑网站的策略。 CRIS辅助编辑单独或与重新组合一起在目标基因座上诱导重组，并杀死非编辑的细胞，从而恢复接近100％的编辑细胞。多个CRRNA可同时修改几个基因座。我们的结果表明，CRISPR介导的基因组编辑仅需要编程CRRNA和模板序列，因此构成了基因工程的有用工具。
The targeting of nucleases to specific DNA sequences facilitates genome editing. Recent work demonstrated that the CRISPR-associated (Cas) nuclease Cas9 can be targeted to sequences in vitro simply by modifying a short7 CRISPR RNA (crRNA) guide. Here we use this CRISPR-Cas system to introduce marker-free mutations in Streptococcus pneumoniae and Escherichia coli. The approach involves re-programming Cas9 by using a crRNA complementary to a target chromosomal locus and introducing a template DNA harboring a desired mutation and an altered crRNA recognition site for recombination with the target locus. We exhaustively analyze Cas9 target requirements to define the range of targetable sequences and show strategies for editing sites that do not meet these requirements. Alone or together with recombineering, CRISPR assisted editing induces recombination at the targeted locus and kills non-edited cells leading to a recovery of close to a 100% of edited cells. Multiple crRNA can be used to modify several loci simultaneously. Our results show that CRISPR-mediated genome editing only requires programming of the crRNA and template sequences and thus constitutes a useful tool for genetic engineering.
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作者：
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Charpentier, Emmanuelle
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通讯作者：
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通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle