Efficient production of a mature and functional gamma secretase protease.
Efficient production of a mature and functional gamma secretase protease.
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DOI：
10.1038/s41598-018-30788-w
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发表时间：
2018-08-27
影响因子：
4.6
通讯作者：
Verdile G
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Khan I;Krishnaswamy S;Sabale M;Groth D;Wijaya L;Morici M;Berger I;Schaffitzel C;Fraser PE;Martins RN;Verdile G
昆虫细胞中的杆状病毒蛋白质表达先前已用于产生大量目的蛋白质，用于随后的生物化学和结构分析。MultiBac杆状病毒蛋白表达系统使得能够使用单个杆状病毒来重构感兴趣的蛋白复合物，从而产生更大的蛋白产量。利用该系统，我们旨在重建γ-分泌酶复合物，这是一种多蛋白酶复合物，对淀粉样β蛋白（Aβ）的产生至关重要。生成含有γ-分泌酶复合物的所有组分的MultiBac载体，并观察所有组分的表达。该复合物在处理APP和Notch衍生的γ-分泌酶底物中具有活性，并且可以用γ-分泌酶抑制剂抑制蛋白水解，证实了重组γ-分泌酶的特异性。最后，使用亲和纯化来纯化活性重组γ-分泌酶复合物。本研究证明了MultiBac蛋白表达系统可用于产生具有活性的γ-分泌酶复合物，为研究γ-分泌酶及其变体提供了一种新的工具。
Baculoviral protein expression in insect cells has been previously used to generate large quantities of a protein of interest for subsequent use in biochemical and structural analyses. The MultiBac baculovirus protein expression system has enabled, the use of a single baculovirus to reconstitute a protein complex of interest, resulting in a larger protein yield. Using this system, we aimed to reconstruct the gamma (γ)-secretase complex, a multiprotein enzyme complex essential for the production of amyloid-β (Aβ) protein. A MultiBac vector containing all components of the γ-secretase complex was generated and expression was observed for all components. The complex was active in processing APP and Notch derived γ-secretase substrates and proteolysis could be inhibited with γ-secretase inhibitors, confirming specificity of the recombinant γ-secretase enzyme. Finally, affinity purification was used to purify an active recombinant γ-secretase complex. In this study we demonstrated that the MultiBac protein expression system can be used to generate an active γ-secretase complex and provides a new tool to study γ-secretase enzyme and its variants.
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影响因子：
7.7
作者：
Bai, Xiao-chen;Rajendra, Eeson;Scheres, Sjors H. W.
通讯作者：
Scheres, Sjors H. W.
DOI：
10.1124/jpet.112.199356
发表时间：
2013-03-01
影响因子：
3.5
作者：
Albright, Charles F.;Dockens, Randy C.;Tong, Gary
通讯作者：
Tong, Gary
影响因子：
48
作者：
Bieniossek, Christoph;Nie, Yan;Berger, Imre
通讯作者：
Berger, Imre
影响因子：
3.7
作者：
Carinhas N;Robitaille AM;Moes S;Carrondo MJ;Jenoe P;Oliveira R;Alves PM
通讯作者：
Alves PM
DOI：
10.1073/pnas.052436599
发表时间：
2002-03-05
影响因子：
11.1
作者：
Esler, WP;Kimberly, WT;Wolfe, MS
通讯作者：
Wolfe, MS