Methods for Pseudopodia Purification and Proteomic Analysis
Methods for Pseudopodia Purification and Proteomic Analysis
复制标题
伪足纯化和蛋白质组分析方法
DOI：
10.1126/stke.4002007pl4
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发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
R. Klemke
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Yingchun Wang;Shi;Wei Wang;Feng Yang;J. Jacobs;D. Camp;Richard D. Smith;R. Klemke
定向细胞迁移需要在细胞迁移的方向上形成优势伪足。当迁移细胞被化学引诱物或细胞外基质（ECM）梯度刺激时，它会在面对梯度的一侧局部放大信号。这些信号介导肌动蛋白-肌球蛋白细胞骨架的重组，导致细胞的形态极化和伪足延伸。为了识别这些信号，我们开发了一种方法，使用3.0微米多孔过滤器进行大规模定量蛋白质组学和磷酸化蛋白质组学分析，从细胞体中生化分离伪足。在这里，我们详细介绍了伪足纯化和蛋白质组学分析的方法。该模型系统应广泛适用于分析伪足蛋白质组从各种迁移细胞系，包括原代和癌细胞系刺激与各种阵列的化学引诱剂，ECM蛋白质，或两者兼而有之。
Directional cell migration requires the formation of a dominant pseudopodium in the direction toward which the cell migrates. When a migratory cell is stimulated with a chemoattractant or extracellular matrix (ECM) gradient, it responds with localized amplification of signals on the side facing the gradient. The signals mediate reorganization of the actin-myosin cytoskeleton, leading to morphological polarization of the cell and pseudopodium extension. To identify these signals, we developed an approach to biochemically isolate the pseudopodium from the cell body using 3.0-micrometer porous filters for large-scale quantitative proteomic and phosphoproteomic analysis. Here, we detail the methodology for pseudopodium purification and proteomic analysis. This model system should be widely applicable for the analysis of the pseudopodium proteome from various migratory cell lines, including primary and cancer cell lines stimulated with a diverse array of chemoattractants, ECM proteins, or both.
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