The mechanism of tail-anchored protein insertion into the ER membrane.
The mechanism of tail-anchored protein insertion into the ER membrane.
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DOI：
10.1016/j.molcel.2011.07.020
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发表时间：
2011-09-02
期刊：
影响因子：
16
通讯作者：
Denic V
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Wang F;Whynot A;Tung M;Denic V
尾锚定（TA）蛋白通过翻译后插入其c端跨膜结构域进入内质网（ER）进入分泌途径。Get3是一种atp酶，通过与Get1-Get2跨膜复合物相互作用将TA蛋白传递到内质网，但Get3的核苷酸循环如何驱动TA蛋白插入尚不清楚。在这里，我们建立了与Get3结合的核苷酸通过将Get3招募到将TA蛋白交给Get3的伴侣来促进Get3-TA蛋白复合物的形成。生化重组和诱变表明，Get1-Get2复合体包含具有功能关键细胞质区域的最小TA蛋白插入机制。通过构建Get1-Get2胞质结构域的可溶性异源二聚体，我们揭示了Get3释放TA蛋白的机制：Get2将Get3-TA蛋白复合物与Get1依赖于atp酶的底物释放活性连接在一起。最后，我们发现ATP增强了Get3与膜的分离，从而释放了Get1-Get2以进行新一轮的底物插入。
Tail-anchored (TA) proteins access the secretory pathway via posttranslational insertion of their C-terminal transmembrane domain into the endoplasmic reticulum (ER). Get3 is an ATPase that delivers TA proteins to the ER by interacting with the Get1-Get2 transmembrane complex but how Get3’s nucleotide cycle drives TA protein insertion remains unclear. Here, we establish that nucleotide binding to Get3 promotes Get3-TA protein complex formation by recruiting Get3 to a chaperone that hands over TA proteins to Get3. Biochemical reconstitution and mutagenesis reveal that the Get1-Get2 complex comprises the minimal TA protein insertion machinery with functionally critical cytosolic regions. By engineering a soluble heterodimer of Get1-Get2 cytosolic domains, we uncover the mechanism of TA protein release from Get3: Get2 tethers Get3-TA protein complexes into proximity with the ATPase-dependent, substrate-releasing activity of Get1. Lastly, we show that ATP enhances Get3 dissociation from the membrane, thus freeing Get1-Get2 for new rounds of substrate insertion.
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DOI：
10.1006/meth.2000.0955
发表时间：
2000-04-01
期刊：
METHODS-A COMPANION TO METHODS IN ENZYMOLOGY
影响因子：
--
作者：
Matsuoka, K;Schekman, R
通讯作者：
Schekman, R
影响因子：
4
作者：
Favaloro, Vincenzo;Vilardi, Fabio;Dobberstein, Bernhard
通讯作者：
Dobberstein, Bernhard
影响因子：
64.5
作者：
GORLICH, D;RAPOPORT, TA
通讯作者：
RAPOPORT, TA
DOI：
10.1073/pnas.1006036107
发表时间：
2010-07-06
影响因子：
11.1
作者：
Chartron, Justin W.;Suloway, Christian J. M.;Clemons, William M., Jr.
通讯作者：
Clemons, William M., Jr.
影响因子：
4
作者：
Leznicki, Pawel;Clancy, Anne;High, Stephen
通讯作者：
High, Stephen