A solid-supported membrane electrophysiology assay for efficient characterization of ion-coupled transport.
A solid-supported membrane electrophysiology assay for efficient characterization of ion-coupled transport.
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DOI：
10.1016/j.jbc.2021.101220
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发表时间：
2021-10
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Henzler-Wildman KA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Thomas NE;Feng W;Henzler-Wildman KA
转运化学计量的测定可以为深入了解离子偶联转运蛋白的作用机制和功能提供重要信息。传统的逆转电位测定是一种可靠的，一般的方法，用于确定离子偶联转运蛋白的转运化学计量，但这种技术的时间和材料成本阻碍了在多个实验条件下的转运行为的调查。固体支持膜电生理学（SSME）允许多个记录的脂质体或膜样品吸附到传感器上，并足够敏感，以检测运输电流从中等通量转运，是无法进入传统的电生理技术。在这里，我们使用SSME开发了一种新的方法来测量运输化学计量大大提高了吞吐量。使用这种技术，我们能够验证最近报道的质子：胍反向转运体Gdx的固定2：1化学计量比，重现CLC-ec 1的1H+：2Cl−反向转运体化学计量比，并确认CLC-ec 1的松散质子：硝酸根耦合。此外，我们能够证明吸附到SSME传感器上的脂质体的内部内容物的定量交换，以允许在单个样品上测试多个实验条件。我们的SSME方法提供了一种快速，简便，通用的方法来测量运输化学计量，这将有利于未来的机制和功能的离子耦合转运蛋白的研究。
Transport stoichiometry determination can provide great insight into the mechanism and function of ion-coupled transporters. Traditional reversal potential assays are a reliable, general method for determining the transport stoichiometry of ion-coupled transporters, but the time and material costs of this technique hinder investigations of transporter behavior under multiple experimental conditions. Solid-supported membrane electrophysiology (SSME) allows multiple recordings of liposomal or membrane samples adsorbed onto a sensor and is sensitive enough to detect transport currents from moderate-flux transporters that are inaccessible to traditional electrophysiology techniques. Here, we use SSME to develop a new method for measuring transport stoichiometry with greatly improved throughput. Using this technique, we were able to verify the recent report of a fixed 2:1 stoichiometry for the proton:guanidinium antiporter Gdx, reproduce the 1H+:2Cl− antiport stoichiometry of CLC-ec1, and confirm loose proton:nitrate coupling for CLC-ec1. Furthermore, we were able to demonstrate quantitative exchange of internal contents of liposomes adsorbed onto SSME sensors to allow multiple experimental conditions to be tested on a single sample. Our SSME method provides a fast, easy, general method for measuring transport stoichiometry, which will facilitate future mechanistic and functional studies of ion-coupled transporters.
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影响因子：
16.6
作者：
Kermani AA;Macdonald CB;Burata OE;Ben Koff B;Koide A;Denbaum E;Koide S;Stockbridge RB
通讯作者：
Stockbridge RB
DOI：
10.1074/jbc.m116.761080
发表时间：
2016-12-23
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Călinescu O;Linder M;Wöhlert D;Yildiz Ö;Kühlbrandt W;Fendler K
通讯作者：
Fendler K
影响因子：
7.7
作者：
Fitzgerald, Gabriel A.;Mulligan, Christopher;Mindell, Joseph A.
通讯作者：
Mindell, Joseph A.
影响因子：
3.8
作者：
Bozzi, Aaron T.;Bane, Lukas B.;Gaudet, Rachelle
通讯作者：
Gaudet, Rachelle
影响因子：
15
作者：
Jiang, Tao;Han, Wei;Tajkhorshid, Emad
通讯作者：
Tajkhorshid, Emad