Kinesin-1 structural organization and conformational changes revealed by FRET stoichiometry in live cells.
Kinesin-1 structural organization and conformational changes revealed by FRET stoichiometry in live cells.
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DOI：
10.1083/jcb.200605097
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发表时间：
2007-01-01
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Verhey KJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Cai D;Hoppe AD;Swanson JA;Verhey KJ
驱动蛋白马达蛋白驱动细胞货物沿沿着微管轨道运输。如何在细胞中控制马达蛋白活性还没有得到解决，但它可能与蛋白质构象和货物缔合的变化相关联。应用荧光共振能量转移（FRET）化学计量学定量方法，对活细胞中荧光蛋白（FP）标记的驱动蛋白重链（KHC）和驱动蛋白轻链（KLC）亚基，研究了激活和非激活状态下驱动蛋白1的整体结构组织和构象。失活的驱动蛋白-1分子被折叠和自抑制，使得KHC尾阻断KHC马达与微管的初始相互作用。此外，在非活动状态下，KHC马达结构域被KLC亚基推开。因此，FRET化学计量揭示了活细胞中蛋白质复合物的构象变化。对于驱动蛋白-1，激活需要分离KHC马达和尾部结构域的全局构象变化和使KHC马达结构域更靠近在一起的局部构象变化。
Kinesin motor proteins drive the transport of cellular cargoes along microtubule tracks. How motor protein activity is controlled in cells is unresolved, but it is likely coupled to changes in protein conformation and cargo association. By applying the quantitative method fluorescence resonance energy transfer (FRET) stoichiometry to fluorescent protein (FP)–labeled kinesin heavy chain (KHC) and kinesin light chain (KLC) subunits in live cells, we studied the overall structural organization and conformation of Kinesin-1 in the active and inactive states. Inactive Kinesin-1 molecules are folded and autoinhibited such that the KHC tail blocks the initial interaction of the KHC motor with the microtubule. In addition, in the inactive state, the KHC motor domains are pushed apart by the KLC subunit. Thus, FRET stoichiometry reveals conformational changes of a protein complex in live cells. For Kinesin-1, activation requires a global conformational change that separates the KHC motor and tail domains and a local conformational change that moves the KHC motor domains closer together.
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DOI：
10.1083/jcb.140.6.1395
发表时间：
1998-03-23
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Hancock WO;Howard J
通讯作者：
Howard J
影响因子：
9.8
作者：
Beemiller P;Hoppe AD;Swanson JA
通讯作者：
Swanson JA
影响因子：
21.3
作者：
Coy, DL;Hancock, WO;Howard, J
通讯作者：
Howard, J
影响因子：
3.4
作者：
Gordon, GW;Berry, G;Herman, B
通讯作者：
Herman, B
DOI：
10.1083/jcb.200605099
发表时间：
2007-01-01
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Blasius TL;Cai D;Jih GT;Toret CP;Verhey KJ
通讯作者：
Verhey KJ