STIM1 gates the store-operated calcium channel ORAI1 in vitro.
STIM1 gates the store-operated calcium channel ORAI1 in vitro.
复制标题
DOI：
10.1038/nsmb.1724
复制
发表时间：
2010-01
影响因子：
16.8
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
在哺乳动物T细胞和肥大细胞中，通过质膜Ca 2+释放激活的Ca 2+（CRAC）通道的钙库操作的Ca 2+进入依赖于传感蛋白基质相互作用分子1（STIM 1）和通道亚基ORAI 1。为了在体外研究STIM 1-ORAI 1信号传导，我们在酵母Saccharomyces cerevisiae的sec 6 -4菌株中表达了人ORAI 1，并分离了携带ORAI 1的密封膜囊泡从高尔基体区室到质膜。我们通过体外Ca 2+通量测定表明，细菌表达的重组STIM 1打开野生型ORAI 1通道，但不打开由ORAI 1孔突变体E106 Q或ORAI 1严重联合免疫缺陷（SCID）突变体R91 W组装的通道。这些实验表明，STIM 1-ORAI 1相互作用足以在不存在人ORAI 1通道复合物的其他蛋白质的情况下门控重组人ORAI 1通道，并且它们为ORAI 1通道门控的进一步生物化学和生物物理解剖奠定了基础。
Store-operated Ca2+ entry through the plasma membrane Ca2+ release–activated Ca2+ (CRAC) channel in mammalian T cells and mast cells depends on the sensor protein stromal interaction molecule 1 (STIM1) and the channel subunit ORAI1. To study STIM1-ORAI1 signaling in vitro, we have expressed human ORAI1 in a sec6-4 strain of the yeast Saccharomyces cerevisiae and isolated sealed membrane vesicles carrying ORAI1 from the Golgi compartment to the plasma membrane. We show by in vitro Ca2+ flux assays that bacterially expressed recombinant STIM1 opens wild-type ORAI1 channels but not channels assembled from the ORAI1 pore mutant E106Q or the ORAI1 severe combined immunodeficiency (SCID) mutant R91W. These experiments show that the STIM1-ORAI1 interaction is sufficient to gate recombinant human ORAI1 channels in the absence of other proteins of the human ORAI1 channel complex, and they set the stage for further biochemical and biophysical dissection of ORAI1 channel gating.
登录
查看更多内容
影响因子：
64.5
作者：
NOVICK, P;FIELD, C;SCHEKMAN, R
通讯作者：
SCHEKMAN, R
影响因子：
4.8
作者：
Mercer, Jason C.;DeHaven, Wayne I.;Putney, James W., Jr.
通讯作者：
Putney, James W., Jr.
DOI：
10.1152/ajprenal.1998.274.1.f34
发表时间：
1998-01-01
影响因子：
4.2
作者：
Coury, LA;Mathai, JC;Zeidel, ML
通讯作者：
Zeidel, ML
DOI：
10.1073/pnas.0806499105
发表时间：
2008-09-09
影响因子：
11.1
作者：
Ji, Wei;Xu, Pingyong;Chen, Liangyi
通讯作者：
Chen, Liangyi
DOI：
10.1073/pnas.81.17.5330
发表时间：
1984-01-01
期刊：
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA-BIOLOGICAL SCIENCES
影响因子：
--
作者：
BITTER, GA;CHEN, KK;LAI, PH
通讯作者：
LAI, PH