Intracellular detection of cytosine incorporation in genomic DNA by using 5-ethynyl-2'-deoxycytidine.
Intracellular detection of cytosine incorporation in genomic DNA by using 5-ethynyl-2'-deoxycytidine.
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DOI：
10.1002/cbic.201100353
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发表时间：
2011-09-19
期刊：
影响因子：
3.2
通讯作者：
Greenberg, Marc M.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Guan, Lirui;van der Heijden, Godfried W.;Bortvin, Alex;Greenberg, Marc M.
合成了5-乙炔基-2 ′-脱氧胞苷三磷酸（5-Ethynyl-2′-deoxycytidine triphosphate，EdCTP）作为探针，与荧光标记结合使用，以便于分析以DNA为中心的过程（DNA复制、修复和胞嘧啶去甲基化）的体内动力学。动力学分析表明，EdCTP被Klenow exo-和DNA聚合酶β接受为底物。这些酶将5-乙炔基-2 ′-脱氧胞苷（EdC）掺入DNA的效率至多略低于天然dC。在聚合酶掺入和T4 DNA连接酶介导的连接之后，使用具有荧光叠氮化物的点击反应使含有EdC的DNA可视化。随后在小鼠雄性生殖细胞和受精卵中的实验表明，EdC是体内DNA复制的特异性和可靠的报告基因。
5-Ethynyl-2′-deoxycytidine triphosphate (EdCTP) was synthesized as a probe to be used in conjunction with fluorescent labelling to facilitate the analysis of the in vivo dynamics of DNA-centered processes (DNA replication, repair and cytosine demethylation). Kinetic analysis showed that EdCTP is accepted as a substrate by Klenow exo- and DNA polymerase β. Incorporation of 5-ethynyl-2′-deoxycytidine (EdC) into DNA by these enzymes is at most modestly less efficient than native dC. EdC containing DNA was visualized using a click reaction with a fluorescent azide, following polymerase incorporation and T4 DNA ligase mediated ligation. Subsequent experiments in mouse male germ cells and zygotes demonstrated that EdC is a specific and reliable reporter of DNA replication in vivo.
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DOI：
10.1002/anie.201007805
发表时间：
2011-05-23
期刊：
Angewandte Chemie (International ed. in English)
影响因子：
--
作者：
Dai N;Guo J;Teo YN;Kool ET
通讯作者：
Kool ET
影响因子：
62.1
作者：
Newman, Robert H.;Fosbrink, Matthew D.;Zhang, Jin
通讯作者：
Zhang, Jin
影响因子：
64.8
作者：
Barreto, Guillermo;Schaefer, Andrea;Niehrs, Christof
通讯作者：
Niehrs, Christof
DOI：
10.1007/978-1-60761-103-5_17
发表时间：
2009-01-01
期刊：
MEIOSIS, VOL 2: CYTOLOGICAL METHODS
影响因子：
--
作者：
La Salle, Sophie;Sun, Fengyun;Handel, Mary Ann
通讯作者：
Handel, Mary Ann
影响因子：
--
作者：
OAKBERG, EF
通讯作者：
OAKBERG, EF