Raster image correlation spectroscopy as a novel tool for the quantitative assessment of protein diffusional behaviour in solution.
Raster image correlation spectroscopy as a novel tool for the quantitative assessment of protein diffusional behaviour in solution.
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光栅图像相关光谱作为定量评估溶液中蛋白质扩散行为的新工具。
DOI：
10.1002/jps.23105
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发表时间：
2012
影响因子：
3.8
通讯作者：
Hamrang Z
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hamrang Z
光栅图像相关光谱（RICS）作为一种工具，用于表征蛋白质扩散的应用程序进行了评估，使用模型蛋白质，牛血清白蛋白（BSA），作为一个函数的配方和变性条件。RICS结果也验证了动态光散射和荧光相关光谱。本研究的结果表明，从三个实验技术获得的输出之间的相关性。在pH 7下观察到离子强度独立性，并且在pH 4.5下观察到1 µM BSA-Alexa Fluor 488的相应扩散系数降低。相反，在pH 5.2时，较高浓度的样品表现出离子强度依赖性。缓冲液组成，样品预处理，热变性和冻融循环也被发现影响RICS输出，在两个pH值下观察到的扩散系数和颗粒数减少。总之，使用商业共聚焦显微镜获得的图像的RICS分析提供了一个潜在的应用范围，在解决方案中的大分子行为的定量和定性表征。© 2012 Wiley Periodicals，Inc.和American Pharmacologist Association J Pharm Sci 101：2082-2093，2012
The application of raster image correlation spectroscopy (RICS) as a tool for the characterisation of protein diffusion was assessed using a model protein, bovine serum albumin (BSA), as a function of formulation and denaturing conditions. RICS results were also validated against dynamic light scattering and fluorescence correlation spectroscopy. Results from this study demonstrate correlation between outputs obtained from the three experimental techniques. Ionic strength independency was observed at pH 7, and a reduction in the corresponding diffusion coefficients was noted at pH 4.5 for 1 µM BSA–Alexa Fluor 488. Conversely, at pH 5.2, higher-concentration samples exhibited ionic strength dependency. Buffer composition, sample pretreatment, thermal denaturation and freeze–thaw cycling were also found to influence RICS output, with a reduction in the diffusion coefficient and the number of particles observed for both pH values. In conclusion, RICS analysis of images acquired using a commercial confocal microscope offers a potential scope for application to both quantitative and qualitative characterisation of macromolecular behaviour in solution. © 2012 Wiley Periodicals, Inc. and the American Pharmacists Association J Pharm Sci 101:2082–2093, 2012
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