Scalable gene synthesis by selective amplification of DNA pools from high-fidelity microchips.
Scalable gene synthesis by selective amplification of DNA pools from high-fidelity microchips.
复制标题
DOI：
10.1038/nbt.1716
复制
发表时间：
2010-12
影响因子：
46.9
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
廉价、高通量和可靠的基因合成方法的发展将广泛刺激生物学和生物技术的进步。目前，依赖柱合成的寡核苷酸作为DNA来源限制了基因合成中的进一步成本降低。来自DNA微芯片的寡核苷酸可以将成本降低至少一个数量级，但是由于寡核苷酸混合物的高错误率和复杂性，扩大其使用的努力在很大程度上是不成功的。在这里，我们使用高保真的DNA微芯片，选择性寡核苷酸池扩增，优化的基因组装协议，和酶的纠错开发一个高度并行的基因合成平台。我们通过组装47个基因来测试我们的平台，其中包括42个具有挑战性的治疗性抗体序列，共编码约35千碱基对的DNA。这些组装是从含有13，000个编码约2.5兆碱基DNA的寡核苷酸的复杂背景中进行的，这至少是以前发表的尝试的50倍。
Development of cheap, high-throughput, and reliable gene synthesis methods will broadly stimulate progress in biology and biotechnology. Currently, the reliance on column-synthesized oligonucleotides as a source of DNA limits further cost reductions in gene synthesis. Oligonucleotides from DNA microchips can reduce costs by at least an order of magnitude, yet efforts to scale their use have been largely unsuccessful due to the high error rates and complexity of the oligonucleotide mixtures. Here we use high-fidelity DNA microchips, selective oligonucleotide pool amplification, optimized gene assembly protocols, and enzymatic error correction to develop a highly parallel gene synthesis platform. We tested our platform by assembling 47 genes, including 42 challenging therapeutic antibody sequences, encoding a total of ~35 kilo-basepairs of DNA. These assemblies were performed from a complex background containing 13,000 oligonucleotides encoding ~2.5 megabases of DNA, which is at least 50 times larger than previously published attempts.
登录
查看更多内容
影响因子：
14.9
作者：
Gibson DG
通讯作者：
Gibson DG
影响因子：
14.9
作者：
Lee CC;Snyder TM;Quake SR
通讯作者：
Quake SR
影响因子：
46.9
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
3
作者：
Slater GS;Birney E
通讯作者：
Birney E
影响因子：
3.5
作者：
Cormack, BP;Valdivia, RH;Falkow, S
通讯作者：
Falkow, S