Stimulation of beta-adrenergic receptors of S49 lymphoma cells redistributes the alpha subunit of the stimulatory G protein between cytosol and membranes.
Stimulation of beta-adrenergic receptors of S49 lymphoma cells redistributes the alpha subunit of the stimulatory G protein between cytosol and membranes.
复制标题
刺激 S49 淋巴瘤细胞的 β-肾上腺素能受体会在细胞质和细胞膜之间重新分配刺激性 G 蛋白的 α 亚基。
DOI：
10.1073/pnas.86.20.7900
复制
发表时间：
1989
影响因子：
11.1
通讯作者：
Insel,PA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ransnäs,LA;Svoboda,P;Jasper,JR;Insel,PA
刺激性鸟嘌呤核苷酸结合蛋白（Gs）将细胞表面受体与第二信使效应系统连接起来，被认为仅限于质膜。在当前的研究中，我们通过用β-肾上腺素能激动剂异丙肾上腺素处理S49淋巴瘤细胞，然后分离胞质和粗膜组分（分别定义为以150,000 x g离心1小时后的沉淀和上清液），并使用竞争性ELISA和重构技术测定Gs的α亚基（α s）的组分，来测试Gs是否在细胞内重新分布。在基础条件下，在 S49 细胞的上清液部分中鉴定出少量 (10%) α 池。该池的大小在细胞激动剂处理后的前 15 分钟内减小。这种减少被β-肾上腺素能受体拮抗剂阻断，并且在S49变体UNC中没有发生，该变体缺乏受体和Gs之间的功能相互作用。在细胞与异丙肾上腺素孵育 1 小时期间，上清液组分中 α 池的大小几乎增加到总细胞 α 的 50%。在异丙肾上腺素处理之前，只有竞争性 ELISA 足够灵敏，可以检测胞质 α，而在稍后的时间点（大于或等于 30 分钟），通过免疫印迹和来自 cyc-S49 的 Gs 缺陷膜中腺苷酸环化酶 [ATP 焦磷酸裂解酶（环化），EC 4.6.1.1] 的重构，证实了胞质中 α 的存在。细胞。与膜 α 相比，胞质 α 在重构测定中不需要激活（例如，通过 AlF4-）来刺激腺苷酸环化酶。使用选择性识别单体解离α而非异三聚体α的抗体表明胞质α是单体的。这些数据表明αs并不完全定位于质膜，并且激动剂处理使该蛋白质在靶细胞内重新分布。
The stimulatory guanine nucleotide-binding protein (Gs), which links cell-surface receptors to second-messenger effector systems, is assumed to be confined to plasma membranes. In the current studies we tested whether Gs redistributes within cells by treating S49 lymphoma cells with the beta-adrenergic agonist isoproterenol, then separating cytosol and crude membrane fractions (defined as pellet and supernatant, respectively, after centrifugation for 1 hr at 150,000 x g), and assaying fractions for the alpha subunit of Gs (alpha s) using a competitive ELISA and reconstitution techniques. Under basal conditions, a small (10%) pool of alpha s was identified in supernatant fractions of S49 cells. The size of this pool decreased in the first 15 min after agonist treatment of cells. This decrease was blocked by a beta-adrenergic receptor antagonist and did not occur in an S49 variant, UNC, which lacks functional interaction between receptors and Gs. The size of the alpha s pool in supernatant fractions increased to almost 50% of total cellular alpha s during a 1-hr incubation of cells with isoproterenol. Before isoproterenol treatment only the competitive ELISA was sensitive enough to detect cytosolic alpha s, whereas at later time points (greater than or equal to 30 min) the presence of alpha s in the cytosol was confirmed by both immunoblotting and by reconstitution of adenylyl cyclase [ATP pyrophosphate-lyase (cyclizing), EC 4.6.1.1] in Gs-deficient membranes derived from cyc-S49 cells. In contrast to membrane alpha s, cytosolic alpha s did not require activation (e.g., by AlF4-) in the reconstitution assay to stimulate adenylyl cyclase. Use of an antibody that selectively recognizes monomeric dissociated alpha s, but not heterotrimeric alpha s, indicated that cytosolic alpha s is monomeric. These data indicate that alpha s is not exclusively localized to the plasma membrane and that agonist treatment redistributes this protein within target cells.
登录
查看更多内容
人红细胞膜中腺苷酸环化酶的鸟嘌呤核苷酸调节成分的特征。
DOI：
--
发表时间：
1980
期刊：
Biochimica et Biophysica Acta
影响因子：
--
作者：
T. Nielsen;P. Lad;M. S. Preston;M. Rodbell
通讯作者：
M. Rodbell
亚基解离是天然膜中 Gs 蛋白的激素激活机制。
DOI：
--
发表时间：
1988
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Ransnäs,LA;Insel,PA
通讯作者：
Insel,PA
腺苷酸环化酶的抑制性鸟嘌呤核苷酸结合调节成分的纯化和特性。
DOI：
--
发表时间：
1984
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Bokoch,GM;Katada,T;Northup,JK;Ui,M;Gilman,AG
通讯作者：
Gilman,AG
DOI：
10.1016/0006-291x(88)90469-x
发表时间：
1988
影响因子：
3.1
作者：
Codina,J;Kimura,S;Kraus-Friedmann,N
通讯作者：
Kraus-Friedmann,N
影响因子：
64.8
作者：
SULLIVAN, KA;MILLER, RT;BOURNE, HR
通讯作者：
BOURNE, HR