The Sequence GluLys of Human Blood Coagulation Factor VIII Comprises a Binding Site for Activated Factor IX (*)
The Sequence GluLys of Human Blood Coagulation Factor VIII Comprises a Binding Site for Activated Factor IX (*)
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人凝血因子 VIII 的序列 GluLys 包含活化因子 IX 的结合位点 (*)
DOI：
--
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发表时间：
1996
影响因子：
4.8
通讯作者：
K. Mertens
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
P. Lenting;J. V. D. van de Loo;M. Donath;J. V. van Mourik;K. Mertens
在以前的研究中，我们已经表明因子IXa和VIII之间的相互作用涉及因子VIII的轻链，并且这种相互作用被针对因子VIII区Gln-Asp的单克隆抗体CLB-CAg A抑制（Lenting，P. J.，Donath，M. J. S. H、货车莫里克，J.A.，Mertens，K.（1994）J.Biol.Chem.269，7150-7155）。采用不同的重组因子VIII片段，我们现在已经更精确地定位该抗体的表位在A3结构域残基Glu和Met之间。亲水性分析表明，该区域是A3结构域内的主要亲水性外位点的一部分。采用重叠的合成肽，包括因子VIII区域Tyr-Ala的因子IXa与该外位点的相互作用进行了研究。发现因子IXa与对应于因子VIII序列Lys-Lys和Glu-Gln的肽的结合特别有效。相同的肽证明在结合抗体CLB-CAg A中是有效的。进一步的分析显示，肽Lys-Lys和Glu-Gln干扰因子IXa与固定的因子VIII轻链的结合（K分别为0.2 mM和0.3 mM）。此外，这些肽在因子VIIIa存在下抑制因子IXa对因子X的活化（分别为K = 0.2 mM和0.3 mM），但在因子VIIIa不存在下不抑制。平衡结合研究表明，这两种肽结合因子IX酶原和其活化形式，因子IXa，具有相同的亲和力（表观K ≤ 0.2 mM），而完整的因子VIII轻链显示优先结合因子IXa。总之，我们的结果表明，由因子VIII轻链残基Lys-Lys和Glu-Gln组成的肽共享因子IXa结合位点，该位点对于因子X活化因子IXa-因子VIIIa复合物的组装是必需的。我们建议，重叠序列Glu-Lys包括结合激活因子IX的最低要求。
In previous studies we have shown that the interaction between factors IXa and VIII involves the light chain of factor VIII and that this interaction is inhibited by the monoclonal antibody CLB-CAg A against the factor VIII region Gln-Asp (Lenting, P. J., Donath, M. J. S. H., van Mourik, J. A., and Mertens, K.(1994) J. Biol. Chem. 269, 7150-7155). Employing distinct recombinant factor VIII fragments, we now have localized the epitope of this antibody more precisely between the A3 domain residues Glu and Met. Hydropathy analysis indicated that this region is part of a major hydrophilic exosite within the A3 domain. The interaction of factor IXa with this exosite was studied by employing overlapping synthetic peptides encompassing the factor VIII region Tyr-Ala. Factor IXa binding was found to be particularly efficient to peptides corresponding to the factor VIII sequences Lys-Lys and Glu-Gln. The same peptides proved effective in binding antibody CLB-CAg A. Further analysis revealed that peptides Lys-Lys and Glu-Gln interfere with binding of factor IXa to immobilized factor VIII light chain (K ≈ 0.2 mM and 0.3 mM, respectively). Moreover, these peptides inhibit factor X activation by factor IXa in the presence of factor VIIIa (K ≈ 0.2 mM and 0.3 mM, respectively) but not in its absence. Equilibrium binding studies revealed that these two peptides bind to the factor IX zymogen and its activated form, factor IXa, with the same affinity (apparent K ≈ 0.2 mM), whereas the complete factor VIII light chain displays preferential binding to factor IXa. In conclusion, our results demonstrate that peptides consisting of the factor VIII light chain residues Lys-Lys and Glu-Gln share a factor IXa binding site that is essential for the assembly of the factor X-activating factor IXa-factor VIIIa complex. We propose that the overlapping sequence Glu-Lys comprises the minimal requirements for binding to activated factor IX.
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DOI：
--
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--
作者：
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DOI：
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--
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通讯作者：
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