Mapping the orientation of nuclear pore proteins in living cells with polarized fluorescence microscopy.
Mapping the orientation of nuclear pore proteins in living cells with polarized fluorescence microscopy.
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DOI：
10.1038/nsmb.2056
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发表时间：
2011-06
影响因子：
16.8
通讯作者：
Simon, Sanford M.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kampmann, Martin;Atkinson, Claire E.;Mattheyses, Alexa L.;Simon, Sanford M.
核孔复合体（NPC）穿透核膜，以促进细胞核和细胞质之间的选择性运输。NPC由约30种不同蛋白质的多个拷贝组成，称为核孔蛋白，其在NPC中的排列是结构生物学中未解决的主要难题。已经提出了NPC结构的各种替代模型，但没有在完整的NPC中进行实验测试。我们提出了一种方法，利用偏振荧光显微镜研究核孔蛋白的方向在活酵母和哺乳动物细胞。我们的研究结果支持酵母Nic 96和人Nup 133-Nup 107的排列，它们的长轴近似平行于核膜平面。这种方法可以补充X射线晶体学和电子显微镜，以产生一个高分辨率的地图，整个NPC，并可以监测核质运输和NPC组装过程中的核孔蛋白重排。这种策略也可以适用于其他大分子机器。
The nuclear pore complex (NPC) perforates the nuclear envelope to facilitate selective transport between nucleus and cytoplasm. The NPC is composed of multiple copies of ~30 different proteins, termed nucleoporins, whose arrangement within the NPC is a major unsolved puzzle in structural biology. Various alternative models for NPC architecture have been proposed but not tested experimentally in intact NPCs. We present a method using polarized fluorescence microscopy to investigate nucleoporin orientation in live yeast and mammalian cells. Our results support an arrangement of both yeast Nic96 and human Nup133–Nup107 with their long axes approximately parallel to the nuclear envelope plane. This method can complement X-ray crystallography and electron microscopy to generate a high-resolution map of the entire NPC, and could monitor nucleoporin rearrangements during nucleocytoplasmic transport and NPC assembly. This strategy can also be adapted for other macromolecular machines.
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DOI：
10.1073/pnas.0907453106
发表时间：
2009-08-25
影响因子：
11.1
作者：
Seo, Hyuk-Soo;Ma, Yingli;Hoelz, Andre
通讯作者：
Hoelz, Andre
影响因子：
16
作者：
Schrader, Nils;Stelter, Philipp;Vetter, Ingrid R.
通讯作者：
Vetter, Ingrid R.
影响因子：
16
作者：
Boehmer, Thomas;Jeudy, Sandra;Schwartz, Thomas U.
通讯作者：
Schwartz, Thomas U.
影响因子：
2.9
作者：
Elsliger, MA;Wachter, RM;Remington, SJ
通讯作者：
Remington, SJ
DOI：
10.1073/pnas.0506345103
发表时间：
2006-02-14
影响因子：
11.1
作者：
Devos, D;Dokudovskaya, S;Sali, A
通讯作者：
Sali, A