A transcription activator-like effector toolbox for genome engineering.
A transcription activator-like effector toolbox for genome engineering.
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DOI：
10.1038/nprot.2011.431
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发表时间：
2012-01-05
期刊：
影响因子：
14.8
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中科院分区：
文献类型：
--
作者：
转录激活因子样效应子（TALEs）是一类在植物病原体黄单胞菌属中发现的天然存在的DNA结合蛋白。每个TALEs的DNA结合结构域由串联的34个氨基酸重复模块组成，可以根据简单的密码重新排列以靶向新的DNA序列。定制的TALE可用于多种基因组工程应用，包括转录调节和基因组编辑。在这里，我们描述了一个工具箱，用于使用分层连接程序快速构建定制TALE转录因子（TALE-TF）和核酸酶（TALEN）。该工具箱有助于在一周内快速构建自定义TALE TF和TALEN，并且可以轻松扩展以并行构建多个目标的TALE。我们还提供了分别使用qRT-PCR和Surveyor核酸酶测试定制TALE-TF和TALEN在哺乳动物细胞中的活性的细节。这里描述的TALE工具箱将使广泛的生物应用成为可能。
Transcription activator-like effectors (TALEs) are a class of naturally occurring DNA binding proteins found in the plant pathogen Xanthomonas sp. The DNA binding domain of each TALE consists of tandem 34-amino acid repeat modules that can be rearranged according to a simple cipher to target new DNA sequences. Customized TALEs can be used for a wide variety of genome engineering applications, including transcriptional modulation and genome editing. Here we describe a toolbox for rapid construction of custom TALE transcription factors (TALE-TFs) and nucleases (TALENs) using a hierarchical ligation procedure. This toolbox facilitates affordable and rapid construction of custom TALE-TFs and TALENs within one week and can be easily scaled up to construct TALEs for multiple targets in parallel. We also provide details for testing the activity in mammalian cells of custom TALE-TFs and TALENs using, respectively, qRT-PCR and Surveyor nuclease. The TALE toolbox described here will enable a broad range of biological applications.
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影响因子：
14.9
作者：
Epinat, JC;Arnould, S;Lacroix, E
通讯作者：
Lacroix, E
影响因子：
3.7
作者：
Geissler R;Scholze H;Hahn S;Streubel J;Bonas U;Behrens SE;Boch J
通讯作者：
Boch J
影响因子：
3.7
作者：
Engler, Carola;Kandzia, Romy;Marillonnet, Sylvestre
通讯作者：
Marillonnet, Sylvestre
影响因子：
14.8
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
14.9
作者：
Li T;Huang S;Jiang WZ;Wright D;Spalding MH;Weeks DP;Yang B
通讯作者：
Yang B