Increased N,N-Dimethyl Leucine Isobaric Tag Multiplexing by a Combined Precursor Isotopic Labeling and Isobaric Tagging Approach.
Increased N,N-Dimethyl Leucine Isobaric Tag Multiplexing by a Combined Precursor Isotopic Labeling and Isobaric Tagging Approach.
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DOI：
10.1021/acs.analchem.8b01301
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发表时间：
2018-09-18
影响因子：
7.4
通讯作者：
Li L
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Frost DC;Rust CJ;Robinson RAS;Li L
在基于发现的蛋白质组学研究中，多重同量异序标签已成为高通量定量分析复杂生物样品的有价值的工具。将稳定同位素质量差标记与基于多重同量异位素标签的定量配对的混合标记策略通过大大增加多重能力进一步促进这些研究。在这项工作中，我们提出了一种具有成本效益的化学标记方法，该方法将双链体稳定同位素二甲基标记与我们定制的12重N，N-二甲基亮氨酸（DiLeu）同量异序标签结合在一起，采用前体同位素标记和同量异序标签（cPILOT）策略，该策略与各种生物样品兼容，并允许在单个LC-MS/MS实验中进行24重定量。我们通过标记酵母菌群并在Orbitrap Fusion Lumos上进行原理验证定量实验来证明DiLeu cPILOT方法的实用性。
Multiplex isobaric tags have become valuable tools for high-throughput quantitative analysis of complex biological samples in discovery-based proteomics studies. Hybrid labeling strategies that pair stable isotope mass difference labeling with multiplex isobaric tag-based quantification further facilitate these studies by greatly increasing multiplexing capability. In this work, we present a cost-effective chemical labeling approach that couples duplex stable isotope dimethyl labeling with our custom 12-plex N,N-dimethyl leucine (DiLeu) isobaric tags in a combined precursor isotopic labeling and isobaric tagging (cPILOT) strategy that is compatible with a wide variety of biological samples and permits 24-plex quantification in a single LC-MS/MS experiment. We demonstrate the utility of the DiLeu cPILOT approach by labeling yeast digests and performing proof-of-principle quantification experiments on the Orbitrap Fusion Lumos.
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