Expanding luciferase reporter systems for cell-free protein expression.
Expanding luciferase reporter systems for cell-free protein expression.
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DOI：
10.1038/s41598-022-15624-6
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发表时间：
2022-07-07
影响因子：
4.6
通讯作者：
Adamala, Katarzyna P.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Sato, Wakana;Rasmussen, Melanie;Deich, Christopher;Engelhart, Aaron E.;Adamala, Katarzyna P.
在无细胞转录翻译（TXTL）系统中，荧光素酶经常被用作敏感的、多功能的报告基因，用于研究和实际应用，如工程基因部分、验证遗传电路和生物传感器输出。目前，只有两种荧光素酶（Firefly和Renilla）常用，没有底物串扰。在这里，我们展示了无细胞荧光素酶报告系统的扩展，具有两个正交的荧光素酶报告系统：N. nambi荧光素酶（Luz）和LuxAB。这些荧光素酶与萤火虫和雷尼拉底物没有交叉反应性。我们还展示了一种新型荧光素酶的底物再生途径，使无细胞系统中的蛋白质表达监测成为可能。此外，我们通过设计含有部分荧光素酶的细胞提取物，减少了TXTL表达所需的基因数量。我们的研究结果为体外蛋白表达提供了一个具有多个正交发光翻译读数的扩展平台。
Luciferases are often used as a sensitive, versatile reporter in cell-free transcription-translation (TXTL) systems, for research and practical applications such as engineering genetic parts, validating genetic circuits, and biosensor outputs. Currently, only two luciferases (Firefly and Renilla) are commonly used without substrate cross-talk. Here we demonstrate the expansion of the cell-free luciferase reporter system, with two orthogonal luciferase reporters: N. nambi luciferase (Luz) and LuxAB. These luciferases do not have cross-reactivity with the Firefly and Renilla substrates. We also demonstrate a substrate regeneration pathway for one of the new luciferases, enabling long-term time courses of protein expression monitoring in the cell-free system. Furthermore, we reduced the number of genes required in TXTL expression, by engineering a cell extract containing part of the luciferase enzymes. Our findings lead to an expanded platform with multiple orthogonal luminescence translation readouts for in vitro protein expression.
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DOI：
10.1073/pnas.0607898104
发表时间：
2007-10-16
影响因子：
11.1
作者：
Lane, M. Chelsea;Alteri, Christopher J.;Mobley, Harry L. T.
通讯作者：
Mobley, Harry L. T.
影响因子：
5.7
作者：
Arce A;Guzman Chavez F;Gandini C;Puig J;Matute T;Haseloff J;Dalchau N;Molloy J;Pardee K;Federici F
通讯作者：
Federici F
影响因子：
4.6
作者：
Kwon YC;Jewett MC
通讯作者：
Jewett MC
DOI：
10.3791/50762
发表时间：
2013-09-16
期刊：
Journal of visualized experiments : JoVE
影响因子：
--
作者：
Sun ZZ;Hayes CA;Shin J;Caschera F;Murray RM;Noireaux V
通讯作者：
Noireaux V
影响因子：
4
作者：
Schwinn, Marie K.;Machleidt, Thomas;Wood, Keith V.
通讯作者：
Wood, Keith V.