Solid-State NMR of a Large Membrane Protein by Paramagnetic Relaxation Enhancement.
Solid-State NMR of a Large Membrane Protein by Paramagnetic Relaxation Enhancement.
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DOI：
10.1021/jz200768r
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发表时间：
2011-07-21
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Rienstra CM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Tang M;Berthold DA;Rienstra CM
膜蛋白在许多生物学功能中发挥重要作用。固态核磁共振光谱学是唯一适合于研究膜环境中的膜蛋白的结构和动力学。由于标记的高分子量蛋白质的数量有限，获得高质量的膜蛋白质的固态NMR谱的主要挑战是灵敏度。在这里，我们证明了顺磁性金属（Cu2+）离子，通过EDTA或螯合剂脂质，到膜蛋白样品的快速魔角旋转（MAS）和低功率1H去耦下的快速数据收集。光谱灵敏度DsbB（20 kDa），一个完整的膜蛋白，在相同的实验时间内增加一倍以上，由于1 H T1弛豫增强Cu2+离子，与DsbB天然折叠和活性位点完整。这种技术可以实现获得多维固态NMR光谱的化学位移分配和结构解析的大膜蛋白与小样品量。
Membrane proteins play an important role in many biological functions. Solid-state NMR spectroscopy is uniquely suited for studying structure and dynamics of membrane proteins in a membranous environment. The major challenge to obtain high quality solid-state NMR spectra of membrane proteins is sensitivity, due to limited quantities of labeled high-molecular-weight proteins. Here we demonstrate the incorporation of paramagnetic metal (Cu2+) ions, through either EDTA or a chelator lipid, into membrane protein samples for rapid data collection under fast magic-angle spinning (MAS) and low power 1H decoupling. Spectral sensitivity of DsbB (20 kDa), an integral membrane protein, more than doubles in the same experimental time due to 1H T1 relaxation enhancement by Cu2+ ions, with DsbB native fold and active site intact. This technique can be implemented to acquire multidimensional solid-state NMR spectra for chemical shift assignments and structure elucidation of large membrane proteins with small sample quantities.
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影响因子：
8
作者：
Li, Ying;Berthold, Deborah A.;Rienstra, Chad M.
通讯作者：
Rienstra, Chad M.
影响因子：
4.4
作者：
Ishii, Y
通讯作者：
Ishii, Y
DOI：
10.1073/pnas.0900908106
发表时间：
2009-06-09
影响因子：
11.1
作者：
Bajaj, Vikram S.;Mak-Jurkauskas, Melody L.;Griffin, Robert G.
通讯作者：
Griffin, Robert G.
来自固态NMR的流感M2质子通道中质子传导和门控的机制。
DOI：
10.1126/science.1191714
发表时间：
2010-10-22
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Hu F;Luo W;Hong M
通讯作者：
Hong M
影响因子：
15
作者：
Hou, Guangjin;Yan, Si;Sun, Shangjin;Han, Yun;Byeon, In-Ja L.;Ahn, Jinwoo;Concel, Jason;Samoson, Ago;Gronenborn, Angela M.;Polenova, Tatyana
通讯作者：
Polenova, Tatyana