Inducible cassette exchange: a rapid and efficient system enabling conditional gene expression in embryonic stem and primary cells.
Inducible cassette exchange: a rapid and efficient system enabling conditional gene expression in embryonic stem and primary cells.
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DOI：
10.1002/stem.715
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发表时间：
2011-10
期刊：
影响因子：
5.2
通讯作者：
Kyba, Michael
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Iacovino, Michelina;Bosnakovski, Darko;Fey, Holger;Rux, Danielle;Bajwa, Gagan;Mahen, Elisabeth;Mitanoska, Ana;Xu, Zhaohui;Kyba, Michael
遗传修饰对于解决细胞命运的规范和维持的研究至关重要，然而用于工程修饰的方法是低效的。我们展示了一个快速有效的重组系统，其中一个可诱导的，floxed cre等位基因取代自己与传入的转基因。我们将这种诱导型盒式交换（ICE）等位基因定位于HPRT基因座，并在小鼠胚胎干（ES）细胞和衍生ICE小鼠的原代细胞中证明了重组。使用慢病毒载体，我们证明了在人ES细胞中随机整合的ICE位点的重组。为了说明该系统的实用性，我们将肌源性调节因子Myf5插入每个平台的ICE位点。这使得小鼠和人ES细胞能够有效地定向分化为骨骼肌，以及体外培养的原代细胞的条件性肌源性转决定。因此，这种多功能的工具非常适合于功能获得性研究，以探测基因在细胞命运的规范和重编程中的功能。
Genetic modification is critically enabling for studies addressing specification and maintenance of cell fate, however methods for engineering modifications are inefficient. We demonstrate a rapid and efficient recombination system in which an inducible, floxed cre allele replaces itself with an incoming transgene. We target this inducible cassette exchange (ICE) allele to the HPRT locus, and demonstrate recombination in murine embryonic stem (ES) cells and primary cells from derivative ICE mice. Using lentivectors, we demonstrate recombination at a randomly integrated ICE locus in human ES cells. To illustrate the utility of this system, we insert the myogenic regulator, Myf5, into the ICE locus in each platform. This enables efficient directed differentiation of mouse and human ES cells into skeletal muscle, and conditional myogenic transdetermination of primary cells cultured in vitro. This versatile tool is thus well suited to gain-of-function studies probing gene function in the specification and reprogramming of cell fate.
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DOI：
10.1073/pnas.1009158107
发表时间：
2010-09-21
影响因子：
11.1
作者：
Portales-Casamar, Elodie;Swanson, Douglas J.;Simpson, Elizabeth M.
通讯作者：
Simpson, Elizabeth M.
DOI：
10.1073/pnas.93.17.9067
发表时间：
1996-08-20
影响因子：
11.1
作者：
Bronson, SK;Plaehn, EG;Smithies, O
通讯作者：
Smithies, O
DOI：
10.1073/pnas.130192197
发表时间：
2000-07-05
影响因子：
11.1
作者：
Urlinger, S;Baron, U;Hillen, W
通讯作者：
Hillen, W
影响因子：
10.5
作者：
Bajard, Lola;Relaix, Frederic;Buckingham, Margaret E.
通讯作者：
Buckingham, Margaret E.
影响因子：
56.9
作者：
Thomson, JA;Itskovitz-Eldor, J;Jones, JM
通讯作者：
Jones, JM