Expression and purification of splicing proteins from mammalian cells.
Expression and purification of splicing proteins from mammalian cells.
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哺乳动物细胞剪接蛋白的表达和纯化。
DOI：
10.1007/978-1-62703-980-2_16
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发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Hastings,MichelleL
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Allemand,Eric;Hastings,MichelleL
Pre-mRNA剪接是一个复杂的过程，由一种称为剪接体的大型核糖核蛋白酶进行，剪接体由多达200种蛋白质组成。尽管这种复杂性，单个剪接体蛋白在剪接反应中的作用已经成功地使用无细胞测定法进行了研究。在许多情况下，为了在体外研究其功能，必须对感兴趣的剪接因子进行表达和纯化。剪接因子的翻译后修饰如磷酸化、甲基化、乙酰化和泛素化对活性很重要。因此，从哺乳动物细胞中纯化它们具有许多优点。在这里，我们描述了一种从哺乳动物细胞中表达和纯化剪接蛋白的方法。
Pre-mRNA splicing is a complex process that is carried out by a large ribonucleoprotein enzyme, termed the spliceosome, which comprises up to 200 proteins. Despite this complexity, the role of individual spliceosomal proteins in the splicing reaction has been successfully investigated using cell-free assays. In many cases, the splicing factor of interest must be expressed and purified in order to study its function in vitro. Posttranslational modifications such as phosphorylation, methylation, acetylation, and ubiquitination of splicing factors are important for activity. Thus, their purification from mammalian cells presents numerous advantages. Here, we describe a method for expression and purification of splicing proteins from mammalian cells.
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